| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 热带假丝酵母的工业应用价值 | 第8-9页 |
| 1.2 热带假丝酵母ω-氧化途径 | 第9-12页 |
| 1.2.1 细胞色素P450单加氧酶参与ω-氧化 | 第10-11页 |
| 1.2.2 脂肪醇氧化酶和脂肪醇脱氢酶参与ω-氧化 | 第11-12页 |
| 1.2.3 脂肪醛脱氢酶参与ω-氧化 | 第12页 |
| 1.3 脂肪醛脱氢酶研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 立题意义与研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-25页 |
| 2.1 材料 | 第14-18页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.2 引物 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要试剂及工具酶 | 第16页 |
| 2.1.4 培养基及试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.5 仪器和设备 | 第17-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-25页 |
| 2.2.1 醛脱氢酶氨基酸序列分析 | 第18页 |
| 2.2.2 热带假丝酵母RNA的提取与定量PCR | 第18-19页 |
| 2.2.3 热带假丝酵母化学法转化与基因组DNA的提取 | 第19页 |
| 2.2.4 CtALD1a和CtALD2a的克隆与异源表达 | 第19-20页 |
| 2.2.5 CtALD1和CtALD2敲除质粒的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.6 CtALD1a或CtALD2a过表达质粒的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.7 热带假丝酵母脂肪醛脱氢酶基因的敲除和过表达 | 第22-23页 |
| 2.2.8 脂肪醛脱氢酶酶活力测定 | 第23-24页 |
| 2.2.9 基因敲除菌株生长性能评价 | 第24页 |
| 2.2.10 二元酸发酵 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-40页 |
| 3.1 醛脱氢酶氨基酸序列的信息学分析 | 第25-26页 |
| 3.2 CtALD1a和CtALD2a的克隆与异源表达 | 第26-29页 |
| 3.2.1 构建pET28a-CtALD1a和pET28a-CtALD2a表达载体 | 第26-28页 |
| 3.2.2 诱导CtALD1a和CtALD2a的表达 | 第28-29页 |
| 3.3 不同碳源培养条件下热带假丝酵母CtALD1和CtALD2的表达 | 第29-31页 |
| 3.4 热带假丝酵母的基因删除及其生理功能评价 | 第31-35页 |
| 3.4.1 构建Ts-CtALD1a(b)-gda324-URA3与Ts-CtALD2a(b)-gda324-URA3 | 第31页 |
| 3.4.2 CtALD1和CtALD2基因敲除菌株的构建 | 第31-34页 |
| 3.4.3 基因敲除菌株的生理功能评价 | 第34-35页 |
| 3.5 基因敲除及过表达对热带假丝酵母产酸的影响 | 第35-40页 |
| 3.5.1 构建CtALD1和CtALD2缺失的二元酸积累菌株 | 第35页 |
| 3.5.2 构建CtALD1a和CtALD2a过表达菌株 | 第35-37页 |
| 3.5.3 摇瓶发酵测试菌株产二元酸的能力 | 第37-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 附录 | 第44-46页 |
