| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 禽流感病毒概述 | 第14页 |
| 1.2 HA蛋白的特点 | 第14-15页 |
| 1.3 NA和M2的特点 | 第15页 |
| 1.4 H5亚型禽流感病毒流行动态 | 第15-16页 |
| 1.5 AIV的常用诊断方法 | 第16-17页 |
| 1.5.1 病毒的分离培养鉴定 | 第16页 |
| 1.5.2 免疫学检测 | 第16页 |
| 1.5.3 分子生物学诊断 | 第16-17页 |
| 1.6 免疫胶体金检测技术的研究情况 | 第17-19页 |
| 1.6.1 胶体金的发现 | 第17-18页 |
| 1.6.2 胶体金的制备 | 第18页 |
| 1.6.3 免疫胶体金检测技术的特点 | 第18页 |
| 1.6.4 病毒性疾病方面的应用 | 第18-19页 |
| 1.6.5 细菌性疾病方面的应用 | 第19页 |
| 1.6.6 寄生虫疾病方面的应用 | 第19页 |
| 1.6.7 其他病原菌方面的应用 | 第19页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 H5亚型广谱单抗的制备和鉴定 | 第21-34页 |
| 2.1 材料和方法 | 第21-27页 |
| 2.1.1 毒株 | 第21页 |
| 2.1.2 细胞和实验动物 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂和仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.4 主要溶液配制方法 | 第22页 |
| 2.1.5 抗原的制备 | 第22页 |
| 2.1.6 抗原的纯化 | 第22-23页 |
| 2.1.7 动物免疫 | 第23页 |
| 2.1.8 复苏SP2/0骨髓瘤细胞 | 第23页 |
| 2.1.9 制备饲养细胞 | 第23页 |
| 2.1.10 制备免疫脾细胞 | 第23页 |
| 2.1.11 细胞融合 | 第23-24页 |
| 2.1.12 建立间接ELISA方法 | 第24-25页 |
| 2.1.13 筛选阳性克隆 | 第25页 |
| 2.1.14 杂交瘤细胞的亚克隆和扩大培养 | 第25页 |
| 2.1.15 腹水的制备 | 第25页 |
| 2.1.16 单抗稳定性的检测 | 第25页 |
| 2.1.17 单抗亚类的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.1.18 单抗腹水和细胞上清效价的测定 | 第26页 |
| 2.1.19 单抗广谱性试验 | 第26页 |
| 2.1.20 单抗特异性试验 | 第26页 |
| 2.1.21 Westernblotting鉴定 | 第26-27页 |
| 2.1.22 间接免疫荧光试验 | 第27页 |
| 2.2 结果 | 第27-33页 |
| 2.2.1 病毒的HA效价和浓度 | 第27页 |
| 2.2.2 间接ELISA方法 | 第27-29页 |
| 2.2.3 单抗的稳定性 | 第29页 |
| 2.2.4 单抗的亚类 | 第29页 |
| 2.2.5 单抗的效价 | 第29-30页 |
| 2.2.6 单抗的广谱性 | 第30页 |
| 2.2.7 单抗的特异性 | 第30-31页 |
| 2.2.8 Westernblotting分析 | 第31页 |
| 2.2.9 间接免疫荧光分析 | 第31-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 H5亚型禽流感胶体金试纸条及斑点金免疫渗滤卡的研制 | 第34-47页 |
| 3.1 材料和方法 | 第34-39页 |
| 3.1.1 毒株和抗体 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第34-35页 |
| 3.1.3 主要溶液配制方法 | 第35页 |
| 3.1.4 胶体金免疫层析试纸条和斑点金免疫渗滤卡的制备材料 | 第35页 |
| 3.1.5 腹水的纯化 | 第35-36页 |
| 3.1.6 试验仪器的预处理 | 第36页 |
| 3.1.7 确定标记蛋白与胶体金最佳pH值 | 第36页 |
| 3.1.8 确定标记蛋白与胶体金蛋白最佳标记量 | 第36页 |
| 3.1.9 制备胶体金标记蛋白 | 第36页 |
| 3.1.10 纯化胶体金标记蛋白 | 第36页 |
| 3.1.11 确定胶体金免疫层析试纸条金标抗体稀释度、检测线抗体浓度和二抗浓度 | 第36-37页 |
| 3.1.12 胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第37页 |
| 3.1.13 胶体金免疫层析试纸条结果的判定 | 第37页 |
| 3.1.14 胶体金免疫层析试纸条特异性试验 | 第37页 |
| 3.1.15 胶体金免疫层析试纸条广谱性试验 | 第37-38页 |
| 3.1.16 胶体金免疫层析试纸条敏感性试验 | 第38页 |
| 3.1.17 胶体金免疫层析试纸条重复性试验 | 第38页 |
| 3.1.18 胶体金免疫层析试纸条稳定性试验 | 第38页 |
| 3.1.19 胶体金免疫层析试纸条对比性试验 | 第38页 |
| 3.1.20 斑点金免疫渗滤卡的制备 | 第38页 |
| 3.1.21 斑点金免疫渗滤卡操作步骤 | 第38页 |
| 3.1.22 斑点金免疫渗滤卡NC膜的选择 | 第38-39页 |
| 3.1.23 斑点金免疫渗滤卡2C8抗体、羊抗鼠二抗浓度的确定以及金标抗体稀释度的确定 | 第39页 |
| 3.1.24 斑点金免疫渗滤卡封闭液的选择 | 第39页 |
| 3.1.25 斑点金免疫渗滤卡敏感性试验 | 第39页 |
| 3.1.26 斑点金免疫渗滤卡重复性试验 | 第39页 |
| 3.1.27 斑点金免疫渗滤卡稳定性试验 | 第39页 |
| 3.2 结果 | 第39-46页 |
| 3.2.1 单抗纯化效果 | 第39-40页 |
| 3.2.2 标记蛋白与胶体金最佳pH值 | 第40-41页 |
| 3.2.3 标记蛋白与胶体金最佳蛋白添加量 | 第41页 |
| 3.2.4 胶体金免疫层析试纸条金标抗体稀释度、检测线抗体浓度和二抗浓度 | 第41页 |
| 3.2.5 胶体金免疫层析试纸条的特异性 | 第41-42页 |
| 3.2.6 胶体金免疫层析试纸条的广谱性 | 第42页 |
| 3.2.7 胶体金免疫层析试纸条的敏感性 | 第42-43页 |
| 3.2.8 胶体金免疫层析试纸条的重复性 | 第43页 |
| 3.2.9 胶体金免疫层析试纸条的稳定性 | 第43页 |
| 3.2.10 胶体金免疫层析试纸条的符合率 | 第43-44页 |
| 3.2.11 斑点金免疫渗透卡NC膜 | 第44页 |
| 3.2.12 斑点金免疫渗透卡检测线抗体浓度、羊抗鼠二抗浓度以及金标抗体的稀释度 | 第44-45页 |
| 3.2.13 斑点金免疫渗透卡封闭液的优化 | 第45页 |
| 3.2.14 斑点金免疫渗透卡的敏感性 | 第45页 |
| 3.2.15 斑点金免疫渗透卡的重复性 | 第45页 |
| 3.2.16 斑点金免疫渗透卡的稳定性 | 第45-46页 |
| 3.3 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |
