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红球菌反-Prelog羰基还原酶重组表达及其催化合成手性醇研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第1章 绪论第12-20页
    1.1 手性化合物及手性醇第12-13页
        1.1.1 手性化合物第12页
        1.1.2 手性醇及其合成第12-13页
    1.2 羰基还原酶不对称还原制备手性醇第13-18页
        1.2.1 羰基还原酶概述第13-14页
        1.2.2 羰基还原酶不对称还原机理第14页
        1.2.3 羰基还原酶催化转化制备手性醇第14-15页
        1.2.4 辅酶再生策略第15-17页
        1.2.5 不对称还原制备手性醇的催化体系第17-18页
    1.3 本课题研究意义和研究内容第18-20页
第2章 菌株的筛选及鉴定第20-26页
    2.1 引言第20页
    2.2 材料与方法第20-22页
        2.2.1 材料第20-21页
        2.2.2 方法第21-22页
    2.3 结果与讨论第22-25页
        2.3.1 α-羟基苯乙酮转化菌株的分离筛选第22-23页
        2.3.2 菌株转化产物光学纯度第23-24页
        2.3.3 菌落及细胞形态特征第24页
        2.3.4 菌株的16srDNA测定及发育树分析第24-25页
    2.4 本章小结第25-26页
第3章 羰基还原酶的克隆、表达及纯化第26-37页
    3.1 引言第26页
    3.2 材料与方法第26-33页
        3.2.1 材料第26-28页
        3.2.2 方法第28-33页
    3.3 结果与分析第33-36页
        3.3.1 红球菌羰基还原酶与表达载体的连接第33-34页
        3.3.2 羰基还原酶基因序列分析第34-35页
        3.3.3 重组蛋白的表达及分离纯化第35页
        3.3.4 酶浓度、酶活及产物构型测定第35-36页
    3.4 本章小结第36-37页
第4章 羰基还原酶的酶学性质第37-46页
    4.1 引言第37页
    4.2 材料与方法第37-39页
        4.2.1 材料第37-38页
        4.2.2 方法第38-39页
    4.3 结果与分析第39-44页
        4.3.1 羰基还原酶的辅酶依赖性第39页
        4.3.2 羰基还原酶的最适催化温度和温度稳定性第39-41页
        4.3.3 羰基还原酶的最适pH和pH稳定性第41-42页
        4.3.4 金属离子对羰基还原酶酶活的影响第42-43页
        4.3.5 羰基还原酶的底物特异性第43-44页
    4.4 本章小结第44-46页
第5章 双酶耦联系统构建及催化条件优化第46-59页
    5.1 前言第46页
    5.2 材料与方法第46-51页
        5.2.1 材料第46-47页
        5.2.2 方法第47-51页
    5.3 结果与分析第51-58页
        5.3.1 近平滑酵母菌甲酸脱氢酶的克隆和表达第51-53页
        5.3.2 蛋白诱导表达及分离纯化第53页
        5.3.3 蛋白浓度与酶活测定第53-54页
        5.3.4 双酶偶联系统中羰基还原酶与甲酸脱氢酶比例的确定第54页
        5.3.5 底物浓度对双酶偶联系统催化能力的影响第54-55页
        5.3.6 两相不对称催化体系的优化第55-58页
    5.4 本章小结第58-59页
第6章 结论与展望第59-61页
    6.1 结论第59-60页
    6.2 展望第60-61页
参考文献第61-68页
致谢第68-69页
攻读学位期间取得的科研成果第69页

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