| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| 1 实时定量 PCR 中内参基因的选择 | 第13-17页 |
| 1.1 实时定量 PCR 的发展 | 第13-14页 |
| 1.2 实时定量 PCR 的校正策略 | 第14-15页 |
| 1.3 内参基因的筛选 | 第15-17页 |
| 2 鱼类性别决定与分化 | 第17-29页 |
| 2.1 鱼类性腺发育和分化 | 第17-18页 |
| 2.2 硬骨鱼类性别决定的影响因素 | 第18-29页 |
| 3 基因启动子研究进展 | 第29-33页 |
| 3.1 启动子基本结构 | 第29页 |
| 3.2 转录因子结构特点 | 第29-31页 |
| 3.3 启动子转录因子结合位点的研究 | 第31-33页 |
| 4 促性腺激素释放激素 GnRH 与性腺发育的研究进展 | 第33-34页 |
| 5 本研究的目的、意义及实验设计 | 第34-35页 |
| 第二章 许氏平鲉仔鱼发育时期和成体组织中内参基因的筛选 | 第35-49页 |
| 1 材料和方法 | 第36-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第36页 |
| 1.2 RNA 的提取 | 第36-38页 |
| 1.3 cDNA 的合成 | 第38-39页 |
| 1.4 内参基因的选择 | 第39页 |
| 1.5 内参基因引物设计 | 第39页 |
| 1.6 实时定量 PCR（qRT-PCR） | 第39-40页 |
| 1.7 数据分析 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-47页 |
| 2.1 引物的扩增性能 | 第40页 |
| 2.2 不同内参基因的表达水平变化范围 | 第40-43页 |
| 2.3 候选内参基因的稳定性分析 | 第43-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 许氏平鲉性别相关基因 Sox3 的克隆和表达分析 | 第49-79页 |
| 1 材料和方法 | 第49-64页 |
| 1.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 1.2 RNA 提取和 cDNA 的合成 | 第50页 |
| 1.3 许氏平鲉 Sox3 基因核心片段的克隆 | 第50-53页 |
| 1.4 许氏平鲉 Sox3 基因 5’UTR 和 3’UTR 的扩增 | 第53-54页 |
| 1.5 许氏平鲉 Sox3 DNA 序列的扩增 | 第54-56页 |
| 1.6 许氏平鲉 Sox3 启动子序列的获得及分析 | 第56-58页 |
| 1.7 许氏平鲉 Sox3 基因启动子区 CpG 岛甲基化水平分析 | 第58-60页 |
| 1.8 许氏平鲉 Sox3 基因在仔鱼发育时期和成体各组织中的定量分析 | 第60页 |
| 1.9 许氏平鲉 Sox3 基因在雌雄性腺中的细胞定位分析 | 第60-64页 |
| 2 结果 | 第64-74页 |
| 2.1 许氏平鲉 Sox3 基因序列分析 | 第64-65页 |
| 2.2 许氏鲆鲉 Sox3 氨基酸序列比对及系统发育进化树的分析 | 第65-67页 |
| 2.3 许氏平鲉 Sox3 基因启动子的克隆及生物信息学分析 | 第67-69页 |
| 2.4 许氏平鲉 Sox3 基因启动子区 CpG 岛甲基化水平分析 | 第69-72页 |
| 2.5 许氏平鲉 Sox3 基因在仔鱼发育时期的表达分析 | 第72页 |
| 2.6 许氏平鲉 Sox3 基因在成体各组织中的表达分析 | 第72-73页 |
| 2.7 许氏平鲉 Sox3 基因在雌雄性腺中的细胞定位分析 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-79页 |
| 第四章 许氏平鲉性别相关基因 Sox9 的克隆和表达分析 | 第79-92页 |
| 1 材料和方法 | 第79-80页 |
| 1.1 实验材料 | 第79页 |
| 1.2 实验方法 | 第79-80页 |
| 2 结果 | 第80-88页 |
| 2.1 许氏平鲉 Sox9 基因序列分析 | 第80-82页 |
| 2.2 许氏平鲉 Sox9 氨基酸序列比对及系统发育进化树的分析 | 第82-84页 |
| 2.3 许氏平鲉 Sox9 基因启动子的克隆及生物信息学分析 | 第84-86页 |
| 2.4 许氏平鲉 Sox9 基因在仔鱼发育时期的表达分析 | 第86页 |
| 2.5 许氏平鲉 Sox9 基因在成体各组织中的表达分析 | 第86-87页 |
| 2.6 许氏平鲉 Sox9 基因在雌雄性腺中的细胞定位分析 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-92页 |
| 第五章 许氏平鲉性别相关基因 Dmrt1 的克隆和表达分析 | 第92-104页 |
| 1 材料和方法 | 第92-93页 |
| 1.1 实验材料 | 第92页 |
| 1.2 实验方法 | 第92-93页 |
| 2 结果 | 第93-100页 |
| 2.1 许氏平鲉 Dmrt1 基因序列分析 | 第93-94页 |
| 2.2 许氏平鲉 Dmrt1 氨基酸序列比对及系统发育进化树的分析 | 第94-96页 |
| 2.3 许氏平鲉 Dmrt1 基因启动子序列的克隆及生物信息学分析 | 第96-98页 |
| 2.4 许氏平鲉 Dmrt1 基因在仔鱼发育时期的表达分析 | 第98-99页 |
| 2.5 许氏平鲉 Dmrt1 基因在成体各组织中的表达分析 | 第99-100页 |
| 2.6 许氏平鲉 Dmrt1 基因在雌雄性腺中的细胞定位分析 | 第100页 |
| 3 讨论 | 第100-104页 |
| 第六章 许氏平鲉 GnRH-I 对性别相关基因 Sox3、Sox9 和 Dmrt1 表达调控的相关研究 | 第104-115页 |
| 1 材料和方法 | 第104-110页 |
| 1.1 实验材料 | 第104-105页 |
| 1.2 GnRH-I 融合蛋白和标签蛋白的原核表达 | 第105-110页 |
| 1.3 GnRH-I 融合蛋白的体内注射 | 第110页 |
| 2 结果 | 第110-113页 |
| 2.1 GnRH-I/pET-32a 和 pET-32a-His 表达载体的构建 | 第110-112页 |
| 2.2 蛋白表达形式的分析及纯化 | 第112页 |
| 2.3 蛋白浓度的测定 | 第112页 |
| 2.4 GnRH-I 注射后性别相关基因 Sox3、Sox9 和 Dmrt1 的表达分析 | 第112-113页 |
| 3 讨论 | 第113-115页 |
| 结论 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-129页 |
| 个人简历 | 第129页 |
| 发表的学术论文 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
