| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 综述 | 第18-42页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 1.1 肽聚糖识别蛋白研究进展 | 第19-27页 |
| 1.1.1 肽聚糖识别蛋白概述 | 第19-21页 |
| 1.1.2 肽聚糖识别蛋白特点 | 第21-22页 |
| 1.1.3 肽聚糖识别蛋白功能 | 第22-27页 |
| 1.2 哺乳动物溶菌酶研究进展 | 第27-31页 |
| 1.2.1 溶菌酶概述 | 第27-28页 |
| 1.2.2 溶菌酶生物学功能 | 第28-29页 |
| 1.2.3 影响溶菌酶活性的因素 | 第29页 |
| 1.2.5 牛溶菌酶研究进展 | 第29-31页 |
| 1.3 蛋白的生物合成 | 第31-40页 |
| 1.3.1 原核表达系统 | 第31-34页 |
| 1.3.2 酵母表达系统 | 第34-37页 |
| 1.3.3 昆虫表达系统 | 第37-38页 |
| 1.3.4 哺乳动物表达系统 | 第38-39页 |
| 1.3.5 小结 | 第39-40页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第40-42页 |
| 第二章 PGLYRP1 基因多态性及其与 SCS、产奶性状关联分析 | 第42-56页 |
| 引言 | 第42-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第43-47页 |
| 2.1.1 材料 | 第43-44页 |
| 2.1.2 方法 | 第44-47页 |
| 2.2 结果与分析 | 第47-53页 |
| 2.2.1 PGLYRP1 基因 SNP 位点检测 | 第47-48页 |
| 2.2.2 PGLYRP1 基因 SNP 位点分型 | 第48页 |
| 2.2.3 PGLYRP1 基因 SNP 位点群体遗传分析 | 第48-51页 |
| 2.2.4 PGLYRP1 基因 SNP 位点与 SCS、产奶性状关联分析 | 第51页 |
| 2.2.5 PGLYRP1 基因 SNP 位点连锁不平衡分析 | 第51-52页 |
| 2.2.6 PGLYRP1 基因 SNP 位点单倍型分析 | 第52页 |
| 2.2.7 SNP 位点单倍型组合与 SCS、产奶性状关联分析 | 第52-53页 |
| 2.3 讨论 | 第53-55页 |
| 2.3.1 肽聚糖识别蛋白杀菌机制 | 第53页 |
| 2.3.2 乳房炎与体细胞评分（SCS） | 第53-54页 |
| 2.3.3 PCR-PIRA 提高 SNP 位点分型效率 | 第54页 |
| 2.3.4 PGLYRP1 基因多态性与性状之间关联 | 第54-55页 |
| 2.4 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 PGLYRP2 基因多态性及其与 SCS、产奶性状关联分析 | 第56-64页 |
| 引言 | 第56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第56-58页 |
| 3.1.1 材料 | 第56-57页 |
| 3.1.2 方法 | 第57-58页 |
| 3.2 结果与分析 | 第58-62页 |
| 3.2.1 PGLYRP2 基因 SNP 位点检测 | 第58-59页 |
| 3.2.2 PGLYRP2 基因 SNP 位点分型 | 第59页 |
| 3.2.3 PGLYRP2 基因 SNP 位点群体遗传分析 | 第59-60页 |
| 3.2.4 PGLYRP2 基因 SNP 位点与 SCS、产奶性状关联分析 | 第60-61页 |
| 3.2.5 PGLYRP2 基因 SNP 位点连锁不平衡分析 | 第61页 |
| 3.2.6 PGLYRP2 基因 SNP 位点单倍型分析 | 第61-62页 |
| 3.2.7 SNP 位点单倍型组合与 SCS、产奶性状关联分析 | 第62页 |
| 3.3 讨论 | 第62-63页 |
| 3.3.1 PGLYRP2 在哺乳动物机体中的功能 | 第62-63页 |
| 3.3.2 PGLYRP2 基因 SNP 与性状之间的关联 | 第63页 |
| 3.4 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 PGLYRP3、PGLYRP4 基因多态性及其与 SCS、产奶性状关联分析 | 第64-75页 |
| 引言 | 第64-65页 |
| 4.1 材料与方法 | 第65-67页 |
| 4.1.1 材料 | 第65页 |
| 4.1.2 方法 | 第65-67页 |
| 4.2 结果与分析 | 第67-73页 |
| 4.2.1 PGLYRP3、PGLYRP4 基因 SNP 位点检测 | 第67页 |
| 4.2.2 PGLYRP3、PGLYRP4 基因 SNP 位点分型 | 第67-68页 |
| 4.2.3 PGLYRP3、PGLYRP4 基因 SNP 位点群体遗传分析 | 第68-69页 |
| 4.2.4 PGLYRP3、PGLYRP4 基因 SNP 位点关联分析 | 第69-70页 |
| 4.2.5 PGLYRP3、PGLYRP4 基因 SNP 位点连锁不平衡分析 | 第70-71页 |
| 4.2.6 PGLYRP3、PGLYRP4 基因 SNP 位点单倍型分析 | 第71-72页 |
| 4.2.7 SNP 位点单倍型组合与 SCS、产奶性状关联分析 | 第72-73页 |
| 4.3 讨论 | 第73-74页 |
| 4.3.1 PGLYRP3 与 PGLYRP4 基因 SNP 位点与性状关联 | 第73-74页 |
| 4.4 小结 | 第74-75页 |
| 第五章 PGLYRP1 基因克隆、序列分析与真核表达 | 第75-101页 |
| 引言 | 第75页 |
| 5.1 材料与方法 | 第75-93页 |
| 5.1.1 材料 | 第75-79页 |
| 5.1.2 方法 | 第79-93页 |
| 5.2 结果与分析 | 第93-99页 |
| 5.2.1 cDNA 内参基因扩增检测 | 第93-94页 |
| 5.2.2 PGLYRP1 信号肽预测 | 第94页 |
| 5.2.3 PGLYRP1 目的片段扩增 | 第94页 |
| 5.2.4 pMD-18T-PGLYRP1 重组克隆载体酶切鉴定 | 第94-95页 |
| 5.2.5 pMD-18T-PGLYRP1 重组克隆载体序列测定及序列分析 | 第95页 |
| 5.2.6 pPIC9K-PGLYRP1 重组表达载体酶切鉴定 | 第95-96页 |
| 5.2.7 pPIC9K-PGLYRP1 转化毕赤酵母 GS11557 | 第96页 |
| 5.2.8 Tricine-SDS-PAGE 电泳检测重组 PGLYRP1 表达 | 第96页 |
| 5.2.9 Western Blot 检测重组 PGLYRP1 表达 | 第96-97页 |
| 5.2.10 重组 PGLYRP1 蛋白浓缩 | 第97页 |
| 5.2.11 重组 PGLYRP1 蛋白纯化 | 第97-98页 |
| 5.2.12 重组 PGLYRP1 抑菌活性检测 | 第98-99页 |
| 5.3 讨论 | 第99-100页 |
| 5.3.1 酵母表达系统优势 | 第99页 |
| 5.3.2 PGLYRP1 蛋白对不同致病菌抗菌活性差异 | 第99-100页 |
| 5.4 小结 | 第100-101页 |
| 第六章 PGLYRP2、PGLYRP3S、PGLYRP3L、PGLYRP4 基因克隆、序列分析与真核表达 | 第101-130页 |
| 引言 | 第101页 |
| 6.1 材料与方法 | 第101-112页 |
| 6.1.1 材料 | 第101页 |
| 6.1.2 方法 | 第101-112页 |
| 6.2 结果与分析 | 第112-128页 |
| 6.2.1 外层片段扩增 | 第112-114页 |
| 6.2.2 外层扩增片段 TA 克隆与测序验证 | 第114-117页 |
| 6.2.3 编码区生物信息学分析 | 第117-119页 |
| 6.2.4 带有酶切位点、信号肽、His 标签的目的片段扩增 | 第119-121页 |
| 6.2.5 重组克隆载体构建与酶切鉴定 | 第121-122页 |
| 6.2.6 重组表达载体酶切鉴定 | 第122-125页 |
| 6.2.7 重组表达蛋白 SDS-PAGE 检测 | 第125-128页 |
| 6.3 讨论 | 第128-129页 |
| 6.3.1 PGLYRP3 基因克隆与可变剪切 | 第128页 |
| 6.3.2 PGLYRP2、PGLYRP3、PGLYRP4 可能不适于在酵母中表达 | 第128-129页 |
| 6.4 小结 | 第129-130页 |
| 第七章 肽聚糖识别蛋白原核表达载体构建与诱导表达 | 第130-151页 |
| 引言 | 第130页 |
| 7.1 材料与方法 | 第130-135页 |
| 7.1.1 材料 | 第130-131页 |
| 7.1.2 方法 | 第131-135页 |
| 7.2 结果与分析 | 第135-149页 |
| 7.2.1 带有酶切位点的目的片段扩增 | 第135-137页 |
| 7.2.2 重组克隆载体构建与酶切鉴定 | 第137-139页 |
| 7.2.3 重组表达载体酶切鉴定 | 第139-142页 |
| 7.2.4 重组目的蛋白诱导表达 | 第142-146页 |
| 7.2.5 重组目的蛋白纯化 | 第146-149页 |
| 7.3 讨论 | 第149-150页 |
| 7.3.1 肽聚糖识别蛋白的包涵体表达 | 第149页 |
| 7.3.2 肽聚糖识别蛋白可溶表达与纯化 | 第149-150页 |
| 7.4 小结 | 第150-151页 |
| 第八章 奶牛六个溶菌酶亚型基因克隆、真核表达与抑菌活性分析 | 第151-166页 |
| 引言 | 第151页 |
| 8.1 材料与方法 | 第151-155页 |
| 8.1.1 材料 | 第151-152页 |
| 8.1.2 方法 | 第152-155页 |
| 8.2 结果与分析 | 第155-163页 |
| 8.2.1 溶菌酶基因片段扩增 | 第155-156页 |
| 8.2.2 重组克隆载体酶切鉴定 | 第156-157页 |
| 8.2.3 重组克隆载体测序鉴定 | 第157-158页 |
| 8.2.4 溶菌酶亚型之间 DNA 与氨基酸序列比对 | 第158页 |
| 8.2.5 重组表达载体构建 | 第158-160页 |
| 8.2.6 线性化重组表达载体转化酵母 GS115 菌株及 G418 筛选 | 第160页 |
| 8.2.7 重组溶菌酶诱导表达及 Tricine-SDS-PAGE 检测 | 第160-161页 |
| 8.2.8 重组溶菌酶硫酸铵浓缩 | 第161页 |
| 8.2.9 重组溶菌酶纯化 | 第161-162页 |
| 8.2.10 重组溶菌酶抑菌活性检测 | 第162-163页 |
| 8.3 讨论 | 第163-165页 |
| 8.3.1 不同溶菌酶亚型基因克隆与表达量差异 | 第163页 |
| 8.3.2 不同溶菌酶亚型抑菌活性差异 | 第163-165页 |
| 8.4 小结 | 第165-166页 |
| 第九章 研究结论 | 第166-168页 |
| 9.1 研究结论 | 第166页 |
| 9.2 创新点 | 第166页 |
| 9.3 下一步研究内容 | 第166-168页 |
| 参考文献 | 第168-178页 |
| 附录 1 PGLYRP1 抑菌试验 | 第178-181页 |
| 附录 2 肽聚糖识别蛋白信号肽预测 | 第181-183页 |
| 附录 3 6 个溶菌酶亚型信号肽预测 | 第183-186页 |
| 附录 4 溶菌酶抑菌试验 | 第186-189页 |
| 附录 5 肽聚糖识别蛋白基因编码区序列 | 第189-192页 |
| 附录 6 5 种溶菌酶亚型 DNA 编码区序列 | 第192-194页 |
| 附录 7 主要仪器设备 | 第194-195页 |
| 缩略词表 | 第195-196页 |
| 致谢 | 第196-197页 |
| 作者简介 | 第197页 |
