| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 碱性淀粉酶概述 | 第8-11页 |
| 1.1.1 碱性淀粉酶的结构 | 第8-9页 |
| 1.1.2 碱性淀粉酶的理化性质 | 第9-10页 |
| 1.1.3 碱性淀粉酶的应用领域 | 第10-11页 |
| 1.2 碱性淀粉酶热稳定性的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.3 提高酶热稳定性的策略 | 第12-13页 |
| 1.4 立题依据及研究意义 | 第13-14页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-22页 |
| 2.1 质粒与菌株 | 第15页 |
| 2.2 仪器 | 第15页 |
| 2.3 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.4 培养基与培养方法 | 第16页 |
| 2.4.1 培养基 | 第16页 |
| 2.4.2 培养方法 | 第16页 |
| 2.5 分子生物学操作 | 第16-18页 |
| 2.5.1 质粒DNA提取 | 第16页 |
| 2.5.2 突变质粒构建 | 第16-18页 |
| 2.5.3 目的产物胶回收 | 第18页 |
| 2.5.4 E. coli感受态细胞制备与转化 | 第18页 |
| 2.5.5 质粒DNA验证 | 第18页 |
| 2.6 分析方法 | 第18-22页 |
| 2.6.1 碱性淀粉酶粗酶液制备 | 第18页 |
| 2.6.2 碱性淀粉酶酶活力测定方法 | 第18-19页 |
| 2.6.3 碱性淀粉酶纯化条件与方法 | 第19页 |
| 2.6.4 蛋白浓度测定 | 第19页 |
| 2.6.5 SDS-PAGE电泳检测表达产物 | 第19页 |
| 2.6.6 新引入二硫键检测 | 第19-20页 |
| 2.6.7 突变对酶动力学参数的影响 | 第20页 |
| 2.6.8 温度对酶活性及稳定性的影响 | 第20页 |
| 2.6.9 pH对酶活性及稳定性的影响 | 第20-21页 |
| 2.6.10 圆二色谱分析 | 第21页 |
| 2.6.11 荧光光谱分析 | 第21页 |
| 2.6.12 碱性淀粉酶的结构同源模拟与分析 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-49页 |
| 3.1 基于结构的理性设计与计算机辅助设计提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第22-31页 |
| 3.1.1 碱性淀粉酶3-D结构同源模拟 | 第22-23页 |
| 3.1.2 碱性淀粉酶热稳定性改造突变位点的确定 | 第23-25页 |
| 3.1.3 碱性淀粉酶热稳定性改造突变体的表达及纯化 | 第25页 |
| 3.1.4 单点突变提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第25-26页 |
| 3.1.5 复合突变提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第26-27页 |
| 3.1.6 碱性淀粉酶突变体的结构分析 | 第27-31页 |
| 3.2 基于计算机模拟设计引入二硫键提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第31-39页 |
| 3.2.1 引入二硫键突变位点的确定 | 第31-32页 |
| 3.2.2 引入二硫键突变体的表达、纯化及检测 | 第32-33页 |
| 3.2.3 引入单对二硫键提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第33-36页 |
| 3.2.4 引入多对二硫键提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第36-37页 |
| 3.2.5 二硫键突变体的结构分析 | 第37-39页 |
| 3.3 基于计算机模拟设计引入精氨酸提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第39-46页 |
| 3.3.1 引入精氨酸突变位点的确定 | 第39-40页 |
| 3.3.2 引入精氨酸突变体的表达及纯化 | 第40-41页 |
| 3.3.3 引入单个精氨酸提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第41-43页 |
| 3.3.4 引入多个精氨酸提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第43-45页 |
| 3.3.5 精氨酸突变体的结构分析 | 第45-46页 |
| 3.4 基于协同作用提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第46-49页 |
| 3.4.1 协同作用提高碱性淀粉酶热稳定性 | 第47页 |
| 3.4.2 协同作用突变体的结构分析 | 第47-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49页 |
| 展望 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第58页 |
