| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 幽门螺杆菌简介 | 第13页 |
| 1.2 幽门螺杆菌流行病学 | 第13-14页 |
| 1.3 幽门螺杆菌主要抗原 | 第14-16页 |
| 1.3.1 空泡毒素（VacA） | 第14页 |
| 1.3.2 尿素酶（Urease） | 第14-15页 |
| 1.3.3 热休克蛋白（Hsp） | 第15页 |
| 1.3.4 外膜蛋白 | 第15-16页 |
| 1.4 幽门螺杆菌检测方法 | 第16-19页 |
| 1.4.1 病原学检测法 | 第16-17页 |
| 1.4.2 病理学检测法 | 第17-18页 |
| 1.4.3 尿素酶依赖实验检测法 | 第18页 |
| 1.4.5 免疫学方法检测 | 第18-19页 |
| 1.4.6 分子生物学检测 | 第19页 |
| 1.5 本论文研究背景、主要内容及意义 | 第19-22页 |
| 1.5.1 研究背景及意义 | 第19-20页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.2.1 Hp 相关抗原制备 | 第20页 |
| 1.5.2.2 Hp 单克隆抗体制备 | 第20页 |
| 1.5.2.3 ELISA 平台和胶体金免疫层析平台筛选适用于抗体夹心法的单克隆抗体搭配组合 | 第20-21页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 幽门螺杆菌相关抗原制备 | 第22-48页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第22-27页 |
| 2.2.1 载体、基因，菌种，质粒及引物 | 第22-23页 |
| 2.2.2 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 常用溶液及培养基的配制 | 第24-27页 |
| 2.2.4.0 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2.4.1 DNA 凝胶电泳工作液 | 第25-26页 |
| 2.2.4.2 蛋白凝胶电泳工作液 | 第26-27页 |
| 2.2.4.4 超声裂解及亲和纯化工作液 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-41页 |
| 2.3.1 幽门螺杆菌全菌抗原制备 | 第27-29页 |
| 2.3.1.1 接种 | 第27-28页 |
| 2.3.1.2 收菌和保菌 | 第28页 |
| 2.3.1.3 超声破碎菌体 | 第28页 |
| 2.3.1.4 SDS-PAGE 电泳 | 第28-29页 |
| 2.3.2 UreaseB 和 Hsp60 基因的获得 | 第29-32页 |
| 2.3.2.1 引物设计 | 第29页 |
| 2.3.2.2 Hp 全菌基因组提取 | 第29-30页 |
| 2.3.2.3 PCR 扩增目的片段 | 第30-32页 |
| 2.3.3 PCR 扩增产物与 pET28a 载体分别双酶切并进行连接反应 | 第32-34页 |
| 2.3.3.1 双酶切反应 | 第32-33页 |
| 2.3.3.2 连接反应 | 第33-34页 |
| 2.3.4 E.coli DH5α和 E.coli BL21（DE3）感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 2.3.5 连接产物转化至 E.coli DH5α | 第34-35页 |
| 2.3.6 质粒提取（用天根质粒小提试剂盒提取质粒） | 第35-36页 |
| 2.3.7 重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.7.1 菌落 PCR 鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.7.2 双酶切鉴定 | 第37页 |
| 2.3.7.3 测序鉴定 | 第37页 |
| 2.3.8 转化及阳性克隆的获得 | 第37-38页 |
| 2.3.9 小量表达及表达条件优化 | 第38-39页 |
| 2.3.10 大量表达及亲和层析纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.10.1 大量表达 | 第39-40页 |
| 2.3.10.2 亲和层析 | 第40页 |
| 2.3.11 纯化后蛋白的透析脱盐 | 第40-41页 |
| 2.4 实验结果 | 第41-47页 |
| 2.4.1 Hp 全菌抗原制备 | 第41页 |
| 2.4.2 UreaseB 基因和 Hsp60 基因扩增结果 | 第41-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 Hp 特异性单克隆抗体的制备及鉴定 | 第48-65页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料 | 第48-52页 |
| 3.2.1 实验动物与细胞株 | 第48页 |
| 3.2.2 主要仪器设备、耗材 | 第48-49页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.4 培养基与常用溶液 | 第50-52页 |
| 3.2.4.1 单克隆抗体制备 | 第50页 |
| 3.2.4.2 ELISA 常用溶液 | 第50-51页 |
| 3.2.4.3 单克隆抗体纯化常用溶液 | 第51页 |
| 3.2.4.4 HRP 标记抗体常用溶液 | 第51-52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-59页 |
| 3.3.1 单克隆抗体的制备 | 第52-57页 |
| 3.3.1.1 Balb/c 小鼠的免疫 | 第52页 |
| 3.3.1.2 间接 ELISA 检测 | 第52-53页 |
| 3.3.1.3 细胞融合 | 第53-55页 |
| 3.3.1.4 阳性克隆的筛选和获得 | 第55-56页 |
| 3.3.1.5 杂交瘤细胞的亚克隆及扩大培养 | 第56页 |
| 3.3.1.6 腹水的制备及抗体的纯化 | 第56-57页 |
| 3.3.2 单克隆抗体的鉴定评价 | 第57-59页 |
| 3.3.2.1 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3.2.2 腹水及纯化后抗体效价的测定 | 第58页 |
| 3.3.2.3 SDS-PAGE 电泳纯化抗体检测 | 第58页 |
| 3.3.2.4 抗体浓度的测定 | 第58-59页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第59-64页 |
| 3.4.1 小鼠血清的效价分析 | 第59-60页 |
| 3.4.2 细胞融合及阳性克隆的筛选 | 第60-61页 |
| 3.4.3 二十一株单克隆抗体亚类的鉴定 | 第61页 |
| 3.4.4 二十一株杂交瘤细胞腹水抗体效价检测 | 第61-62页 |
| 3.4.5 SDS-PAGE 分析纯化后的抗体 | 第62-63页 |
| 3.4.6 抗体的鉴定 | 第63-64页 |
| 3.5 本章小结 | 第64-65页 |
| 第四章 ELISA 平台和胶体金免疫层析平台检测 Hp 抗原方法的建立 | 第65-77页 |
| 4.1 前言 | 第65页 |
| 4.2 实验材料 | 第65-67页 |
| 4.2.1 检测样品 | 第65页 |
| 4.2.2 主要仪器设备 | 第65-66页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第66页 |
| 4.2.4 常用溶液 | 第66-67页 |
| 4.3 实验方法 | 第67-71页 |
| 4.3.1 HRP 标记单克隆抗体 | 第67-68页 |
| 4.3.2 HRP 标记抗体 ELISA 工作浓度确定 | 第68页 |
| 4.3.3 ELISA 平台筛选适用于双抗体夹心法的单克隆抗体对 | 第68页 |
| 4.3.4 单克隆抗体对在 ELISA 平台上工作浓度的优化 | 第68-69页 |
| 4.3.5 喷膜 | 第69页 |
| 4.3.6 胶体金标记单克隆抗体 | 第69-70页 |
| 4.3.7 胶体金免疫层析检测条的组装 | 第70页 |
| 4.3.8 胶体金免疫层析平台筛选抗体配对组合 | 第70-71页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第71-75页 |
| 4.4.1 单克隆抗体在 ELISA 平台配对 | 第71-72页 |
| 4.4.2 单克隆抗体在 ELISA 平台检测灵敏度 | 第72页 |
| 4.4.3 单克隆抗体在胶体金免疫层析平台的配对 | 第72-75页 |
| 4.5 本章小结 | 第75-77页 |
| 结论和展望 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 附件 | 第89页 |
