| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 MAPK级联途径 | 第13-15页 |
| 1.2 MAPK级联组分的结构特点和分类 | 第15-17页 |
| 1.3 植物中的MAPK级联途径的作用 | 第17-23页 |
| 1.3.1 MAPK级联系统与非生物胁迫 | 第17-19页 |
| 1.3.2 MAPK级联系统与植物病害 | 第19-21页 |
| 1.3.3 MAPK级联系统与激素信号 | 第21-22页 |
| 1.3.4 MAPK级联系统与植物的生长发育 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-45页 |
| 2.2.1 棉花的培养与处理 | 第26页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 RNA中基因组DNA的去除 | 第27页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第27-28页 |
| 2.2.5 cDNA纯化 | 第28页 |
| 2.2.6 cDNA的末端加尾反应 | 第28页 |
| 2.2.7 植物基因组DNA的提取 | 第28-30页 |
| 2.2.7.1 CTAB法提取棉花基因组DNA | 第28-29页 |
| 2.2.7.2 棉花基因组DNA的纯化 | 第29页 |
| 2.2.7.3 小量法提取烟草基因组DNA | 第29-30页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳基因片段的回收 | 第30页 |
| 2.2.9 目的片段与克隆载体的连接 | 第30-31页 |
| 2.2.10 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第31页 |
| 2.2.10.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.10.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31页 |
| 2.2.11 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.12 对重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.2.13 DNA序列测定 | 第32页 |
| 2.2.14 cDNA全长序列的获得 | 第32-35页 |
| 2.2.14.1 利用简并引物进行PCR扩增以获得中间片段 | 第32-33页 |
| 2.2.14.2 5'RACE获得5'端序列 | 第33-34页 |
| 2.2.14.3 3'RACE获得3'端序列 | 第34-35页 |
| 2.2.14.4 cDNA全长序列的获得 | 第35页 |
| 2.2.15 全长基因组序列的获得 | 第35-36页 |
| 2.2.16 基因枪基因瞬时表达 | 第36-38页 |
| 2.2.16.1 洋葱表皮瞬时表达的载体制备 | 第36-37页 |
| 2.2.16.2 基因枪微弹的准备 | 第37页 |
| 2.2.16.3 基因枪转化 | 第37-38页 |
| 2.2.17 植物表达载体的构建与转化 | 第38-40页 |
| 2.2.17.1 植物表达载体的构建 | 第38页 |
| 2.2.17.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 2.2.17.3 农杆菌感受态细胞的转化 | 第39页 |
| 2.2.17.4 农杆菌的培养 | 第39页 |
| 2.2.17.5 农杆菌介导转化烟草 | 第39-40页 |
| 2.2.18 转基因植株的抗病性分析 | 第40-41页 |
| 2.2.18.1 病原菌培养基的配制 | 第40页 |
| 2.2.18.2 病原菌的培养 | 第40页 |
| 2.2.18.3 病原物接种实验 | 第40-41页 |
| 2.2.19 生理指标的测定 | 第41-44页 |
| 2.2.19.1 SOD酶活测定 | 第41-42页 |
| 2.2.19.2 过氧化物酶POD酶活测定 | 第42页 |
| 2.2.19.3 过氧化氢酶CAT酶活测定 | 第42页 |
| 2.2.19.4 游离脯氨酸的测定 | 第42-43页 |
| 2.2.19.5 可溶性糖含量的测定 | 第43页 |
| 2.2.19.6 植物组织叶绿素含量的的测定 | 第43-44页 |
| 2.2.20 网络资源及数据库 | 第44页 |
| 2.2.21 生物学软件 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-64页 |
| 3.1 棉花GhMKK6基因的分离和启动子的克隆 | 第45-47页 |
| 3.1.1 GhMKK6中间片段的分离 | 第45页 |
| 3.1.2 GhMKK63'片段和5'片段的分离 | 第45页 |
| 3.1.3 GhMKK6全长cDNA的分离 | 第45-46页 |
| 3.1.4 GhMKK6基因组序列的分离 | 第46页 |
| 3.1.5 GhMKK6启动子序列的分离 | 第46-47页 |
| 3.2 GhMKK6的序列分析 | 第47-52页 |
| 3.2.1 GhMKK6的全长cDNA序列分析 | 第47-48页 |
| 3.2.2 GhMKK6编码的蛋白序列分析 | 第48-50页 |
| 3.2.3 GhMKK6基因组序列分析 | 第50-51页 |
| 3.2.4 GhMKK6的启动子序列分析 | 第51-52页 |
| 3.3 GhMKK6的亚细胞定位分析 | 第52页 |
| 3.4 GhMKK6的表达特性分析 | 第52-56页 |
| 3.4.1 GhMKK6在不同组织部位中的表达特性 | 第52-53页 |
| 3.4.2 GhMKK6响应信号分子的表达模式 | 第53-54页 |
| 3.4.3 GhMKK6响应非生物胁迫的表达模式 | 第54-55页 |
| 3.4.4 GhMKK6响应生物胁迫的表达模式 | 第55-56页 |
| 3.5 超表达GhMKK6烟草的获得与鉴定 | 第56-64页 |
| 3.5.1 植物表达载体的构建 | 第56页 |
| 3.5.2 超表达GhMKK6转基因烟草的获得与鉴定 | 第56页 |
| 3.5.3 超表达GhMKK6的转基因烟草的功能分析 | 第56-64页 |
| 3.5.3.1 超表达GhMKK6烟草对非生物胁迫的抗性分析 | 第56-61页 |
| 3.5.3.2 超表达GhMKK6的烟草对生物胁迫的抗性分析 | 第61-64页 |
| 4 讨论 | 第64-68页 |
| 5 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间发表的主要学术论文 | 第82页 |
