| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 常用缩写词中英文对照表 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 1 实验材料 | 第16-23页 |
| 1.1 细胞株 | 第16页 |
| 1.2 菌株 | 第16页 |
| 1.3 质粒 | 第16页 |
| 1.4 主要试剂 | 第16-18页 |
| 1.5 实验所需引物 | 第18-19页 |
| 1.6 实验器材 | 第19页 |
| 1.7 主要试剂配制 | 第19-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-41页 |
| 2.1 质粒准备 | 第23-25页 |
| 2.2 细胞培养 | 第25-26页 |
| 2.3 WesternBlot检测SMYD3蛋白在HEK293T细胞和Bel-7402细胞中的表达 | 第26-28页 |
| 2.4 CRISPR/Cas9打靶载体的构建与验证 | 第28-32页 |
| 2.5 优化脂质体最佳负载量 | 第32页 |
| 2.6 嘌呤霉素对HEK293T细胞和Bel-7402细胞最低致死浓度筛选 | 第32页 |
| 2.7 CRISPR/Cas9打靶活性检测 | 第32-34页 |
| 2.8 Bel-7402细胞SMYD3基因缺陷型单克隆细胞株制备 | 第34-35页 |
| 2.9 WesternBlot法检测SMYD3蛋白在单克隆细胞株的表达 | 第35-38页 |
| 2.10 靶目的DNA片段测序验证 | 第38-40页 |
| 2.11 SMYD3敲除后对细胞功能的影响 | 第40页 |
| 2.12 统计学分析 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-59页 |
| 3.1 PX459质粒测序结果 | 第41-42页 |
| 3.2 sgRNA设计结果 | 第42页 |
| 3.3 PX459酶切结果 | 第42-43页 |
| 3.4 菌液PCR鉴定阳性sgRNA-PX459重组质粒 | 第43-44页 |
| 3.5 sgRNA-PX459重组质粒测序结果 | 第44-48页 |
| 3.6 细胞培养 | 第48-49页 |
| 3.7 WesternBlot检测SMYD3蛋白在HEK293T细胞和Bel-7402细胞中的表达 | 第49页 |
| 3.8 脂质体转染条件优化 | 第49-51页 |
| 3.9 PCR产物分子量大小验证引物的有效性 | 第51-52页 |
| 3.10 测序验证靶位点PCR引物 | 第52-53页 |
| 3.11 打靶载体活性检测 | 第53-54页 |
| 3.12 WesternBlot检测SMYD3蛋白表达 | 第54-56页 |
| 3.13 筛选SMYD3基因缺陷性Bel-7402细胞株 | 第56-57页 |
| 3.14 cck-8法检测细胞增殖 | 第57-58页 |
| 3.15 划痕实验检测细胞迁移 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 综述 | 第68-77页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 在学期间研究成果 | 第78-79页 |
| 个人简历 | 第79页 |
