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生殖细胞突变在淋巴细胞中功能检测模型的建立、分析和应用

摘要第1-6页
Abstract第6-7页
第一章 前言第7-20页
 1. 小鼠突变品系的快速积累第7-8页
 2. 细胞有丝分裂中的同源重组现象第8-11页
     ·有丝分裂同源重组的重要生物学意义第8-9页
     ·有丝分裂重组中的杂合性缺失现象第9-10页
     ·有丝分裂同源重组模型建立的生物学依据第10-11页
 3. 模式生物研究中各种有丝分裂重组模型的应用第11-16页
     ·果蝇中遗传镶嵌体模型的建立和应用第11-12页
     ·小鼠中有丝分裂同源重组模型的建立和应用第12-16页
 4. 有丝分裂中的反向姐妹染色单体重组现象第16-17页
 5. 淋巴系统是进行有丝分裂重组分析的优秀模型第17-18页
 6. 选题的目的和意义第18-20页
第二章 小鼠免疫系统中单倍体细胞的建立与分析第20-40页
 1. 背景介绍第20-21页
 2. 材料和方法第21-27页
     ·通过染色体删除诱导杂合性缺失的生物学模型第21-22页
     ·iloxP序列设计第22页
     ·3T3染色体删除细胞系的建立第22-23页
     ·条件型染色体删除转基因小鼠的建立第23-24页
     ·利用反向PCR进行转座子插入定位第24页
     ·3T3细胞和小鼠淋巴细胞流式细胞仪分析第24-25页
     ·骨髓B淋巴细胞体外刺激培养第25页
     ·AnnexinV早期细胞凋亡分析第25页
     ·CFSE细胞有丝分裂分析第25页
     ·淋巴细胞染色体组型分析第25-26页
     ·细胞转染和反转录病毒感染第26页
     ·流式细胞仪信号通道名称和解释第26-27页
     ·PCR引物和抗体第27页
 3. 结果第27-38页
     ·3T3细胞中的反向姐妹染色单体重组和结果分析第27-29页
     ·条件型染色体删除转基因小鼠的基因组定位结果第29-30页
     ·反向姐妹染色单体重组导致淋巴细胞特异性的染色体标记变化第30-33页
     ·反向姐妹染色单体重组在小鼠基因组内能被普遍诱导第33-34页
     ·染色体组型分析显示染色体断裂和部分单倍体细胞的产生第34-36页
     ·部分单倍体淋巴细胞具有正常的分裂能力和存活能力第36-38页
 4. 讨论和小结第38-40页
第三章 运用部分单倍体淋巴细胞研究E2A和HEB在淋巴细胞发育过程中的功能第40-54页
 1. 背景介绍第40-41页
 2. 材料和方法第41-42页
     ·E2A和HEB条件型基因剔除小鼠的建立和杂合性缺失分析第41-42页
     ·小鼠淋巴细胞流式细胞仪分析和平均荧光强度检测第42页
     ·细胞计数和统计第42页
     ·PCR引物和抗体第42页
 3. 结果第42-51页
     ·淋巴细胞发育的各个阶段都可以检测到部分单倍体细胞第42-44页
     ·染色体断裂和部分缺失导致发育各个阶段的淋巴细胞数目减少第44-45页
     ·E2A在B细胞发育早期的组织特异性缺失导致B细胞发育中断第45-46页
     ·E2A在B细胞发育早期的杂合性缺失导致祖B细胞和前B细胞明显减少第46-50页
     ·HEB在胸腺T细胞的杂合性缺失导致双阴性T细胞增加和双阳性T细胞减少第50-51页
 4. 讨论和小结第51-54页
第四章 小鼠1号染色体有丝分裂同源重组模型的建立与分析第54-62页
 1. 背景介绍第54-55页
 2. 材料和方法第55-57页
     ·小鼠1号染色体同源重组模型的建立第55-56页
     ·HOR1小鼠(lovp,cd45.1/loxp,cd45.2)的培育和重组模型的建立第56-57页
     ·PCR引物和抗体第57页
 3. 结果第57-60页
     ·在HOR1小鼠T淋巴细胞内成功检测到有丝分裂重组现象第57-58页
     ·HOR1小鼠T淋巴细胞有丝分裂重组效率统计第58-60页
 4. 讨论和小结第60-62页
第五章 运用1号染色体同源重组模型研究DHX9在小鼠T细胞发育中的功能第62-77页
 1. 背景介绍第62-63页
 2. 材料和方法第63-66页
     ·DHX9插入突变小鼠的建立第63-64页
     ·DHX9组织特性细胞同源重组模型的建立和小鼠培育第64-65页
     ·AnnexinV早期细胞凋亡分析第65页
     ·小鼠外周T淋巴细胞体外培养和刺激第65页
     ·RT-PCR第65-66页
     ·PCR引物和抗体第66页
 3. 结果第66-75页
     ·DHX9纯合突变小鼠胚胎致死第66页
     ·DHX9杂合突变小鼠的T淋巴细胞发育基本正常第66-69页
     ·小鼠胸腺中DHX9纯合突变T细胞的相对比例降低第69-70页
     ·小鼠外周DHX9纯合突变细胞易产生凋亡第70-75页
 4. 讨论和小结第75-77页
总结和展望第77-79页
参考文献第79-83页
发表论文第83-84页
致谢第84-86页

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