| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言综述 | 第9-26页 |
| 1.1 黄瓜的生物学特征 | 第9-10页 |
| 1.2 植物花性型研究简介及黄瓜花性型研究进展 | 第10-17页 |
| 1.2.1 黄瓜雌性基因F 的研究 | 第12-14页 |
| 1.2.2 黄瓜单性花决定基因M/m的研究 | 第14-17页 |
| 1.2.2.1 M/m 基因与F/f 基因互作决定黄瓜花器官发育的分子机制 | 第15页 |
| 1.2.2.2 M/m 基因编码产物的作用时期和位置 | 第15-16页 |
| 1.2.2.3 M/m 基因作用通路上下游产物的研究 | 第16-17页 |
| 1.2.2.4 M/m 基因的克隆 | 第17页 |
| 1.2.3 黄瓜性型的其它影响因素 | 第17页 |
| 1.3 植物激素乙烯与黄瓜性型 | 第17-21页 |
| 1.3.1 ACC 合成酶（ACS）多基因家族 | 第18-19页 |
| 1.3.2 黄瓜CsAC52 基因 | 第19-20页 |
| 1.3.3 甜瓜CmAC57 基因与黄瓜CsAC52 基因 | 第20页 |
| 1.3.4 ACS 的酶学活性及保守氨基酸分析 | 第20-21页 |
| 1.4 植物遗传转化方法 | 第21-25页 |
| 1.4.1 农杆菌介导法 | 第22-23页 |
| 1.4.2 基因枪介导法 | 第23-24页 |
| 1.4.3 花粉管通道法 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第25-26页 |
| 第二章 黄瓜M 基因原核功能分析 | 第26-40页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 大肠杆菌菌株及表达载体 | 第26页 |
| 2.1.3 相关试剂和技术服务 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 材料取样 | 第27页 |
| 2.2.2 黄瓜材料总RNA 的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 反转录cDNA 第一链 | 第28页 |
| 2.2.4 黄瓜CsACS1，CsACS2等位基因cDNA序列的克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.5 CsACS2 蛋白同源性比较分析 | 第29页 |
| 2.2.6 黄瓜CsACS2基因定点诱变 | 第29-30页 |
| 2.2.7 原核表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.8 大肠杆菌工程菌株JAde6 的转化与培养 | 第31-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-38页 |
| 2.3.1 CsACS2 基因结构 | 第33页 |
| 2.3.2 CsACS2 蛋白的同源性分析与系统进化树分析 | 第33-35页 |
| 2.3.3 黄瓜CsACS2基因的定点诱变与原核表达载体构建 | 第35-37页 |
| 2.3.4 原核表达功能分析 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 黄瓜M 基因的烟草转化 | 第40-59页 |
| 3.1 材料 | 第40页 |
| 3.1.1 植物材料与药剂 | 第40页 |
| 3.1.2 农杆菌菌株与植物表达载体 | 第40页 |
| 3.1.3 相关试剂药品及培养基 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-48页 |
| 3.2.1 植物材料 DNA 的小量提取 | 第40页 |
| 3.2.2 烟草转化载体p8I121-P_M-CsACS2 和pBI121-P_(35S)-CsACS2 的构建 | 第40-42页 |
| 3.2.3 农杆菌感受态细胞的制备及表达载体的转化 | 第42页 |
| 3.2.4 菌株活化及工程菌液的制备 | 第42-43页 |
| 3.2.5 烟草转化体系 | 第43页 |
| 3.2.6 转基因烟草的 PCR 检测 | 第43页 |
| 3.2.7 烟草基因组 DNA 的大量提取 | 第43-44页 |
| 3.2.8 转基因烟草的Southern 检测 | 第44-47页 |
| 3.2.8.1 基因组 DNA 的限制性酶切消化 | 第44页 |
| 3.2.8.2 限制性酶切消化产物的浓缩 | 第44页 |
| 3.2.8.3 凝胶转膜和印迹 | 第44-45页 |
| 3.2.8.4 探针标记 | 第45-46页 |
| 3.2.8.5 预杂交和杂交 | 第46页 |
| 3.2.8.6 洗膜 | 第46页 |
| 3.2.8.7 显影 | 第46-47页 |
| 3.2.9 转基因烟草的斑点印记检测 | 第47页 |
| 3.2.10 转基因烟草的RT-PCR分析 | 第47-48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-55页 |
| 3.3.1 植物表达载体的检测 | 第49页 |
| 3.3.2 农杆菌阳性转化株PCR 检测 | 第49-50页 |
| 3.3.3 转基因烟草的PCR 检测 | 第50-52页 |
| 3.3.4 转pBI121-P_M-CsAC52 烟草的Southern分析 | 第52页 |
| 3.3.5 转pBI121-P_(35S)-CsACS2 载体烟草的斑点印记检测 | 第52-53页 |
| 3.3.6 转基因烟草的RT-PCR分析 | 第53-54页 |
| 3.3.7 转基因烟草表型分析 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表论文和申请专利情况 | 第71-73页 |
