| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 本研究中涉及的人畜共患病的危害及流行近况 | 第12-16页 |
| 1.1 登革热 | 第12-13页 |
| 1.2 森林脑炎 | 第13页 |
| 1.3 乙型脑炎 | 第13-14页 |
| 1.4 黄热病 | 第14-15页 |
| 1.5 西尼罗河热 | 第15页 |
| 1.6 猪链球菌病 | 第15-16页 |
| 2 蛋白芯片技术研究进展 | 第16-19页 |
| 2.1 蛋白芯片的概念与分类 | 第16-17页 |
| 2.2 蛋白芯片技术的原理 | 第17-18页 |
| 2.3 蛋白芯片技术在诊断方面的优势存在问题和应用前景 | 第18-19页 |
| 3 ELISA-array蛋白芯片技术 | 第19-21页 |
| 3.1 酶联免疫吸附试验 | 第19-20页 |
| 3.2 化学发光免疫分析 | 第20页 |
| 3.3 ELISA-array蛋白芯片技术的原理和优势 | 第20-21页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 六种虫媒病毒病原体抗体检测蛋白芯片的研制 | 第22-48页 |
| 1 材料和方法 | 第22-31页 |
| 1.1 材料 | 第22-26页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 1.1.2 酶、试剂盒和主要试剂和血清 | 第23-24页 |
| 1.1.3 培养基 | 第24页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 1.1.5 引物的设计与合成 | 第24-26页 |
| 1.2 方法 | 第26-31页 |
| 1.2.1 重组表达质粒的构建 | 第26页 |
| 1.2.2 重组菌的诱导表达及鉴定 | 第26页 |
| 1.2.3 重组蛋白的纯化 | 第26-28页 |
| 1.2.3.1 可溶性表达形式目的蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 1.2.3.2 包涵体表达形式目的蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 1.2.4 蛋白的透析及定量 | 第28页 |
| 1.2.5 蛋白芯片的制备 | 第28-30页 |
| 1.2.5.1 点制蛋白芯片 | 第28页 |
| 1.2.5.2 蛋白芯片的质控及操作过程 | 第28-30页 |
| 1.2.6 病毒抗原的初步筛选 | 第30页 |
| 1.2.7 针对初筛病毒抗原的ELISA方法验证与对比试验 | 第30页 |
| 1.2.8 临床血清样本验证已筛选出的病毒抗原及ELISA-array方法可信度评价 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-45页 |
| 2.1 重组菌的表达及鉴定结果分析 | 第31-32页 |
| 2.2 蛋白纯化结果 | 第32-33页 |
| 2.3 重组抗原的筛选 | 第33-40页 |
| 2.3.1 兔抗血清初步筛选病毒抗原结果 | 第33-37页 |
| 2.3.2 蛋白芯片初步筛选病毒抗原结果分析 | 第37-39页 |
| 2.3.2.1 特异性分析 | 第37-38页 |
| 2.3.2.2 回归方程线性相关性分析 | 第38-39页 |
| 2.3.3 ELISA对比试验 | 第39-40页 |
| 2.3.3.1 特异性对比分析 | 第39-40页 |
| 2.3.3.2 灵敏度对比分析 | 第40页 |
| 2.4 临床血清样本评价ELISA-array方法可信度 | 第40-45页 |
| 2.4.1 蛋白芯片的质控 | 第40-42页 |
| 2.4.2 临床阳性样本的芯片检测结果 | 第42-44页 |
| 2.4.3 临床阳性样本抗体水平的ELISA对比实验结果 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-48页 |
| 3.1 重组抗原的纯化 | 第45-46页 |
| 3.2 重组抗原的特异性 | 第46-47页 |
| 3.3 利用以上几种病毒重组抗原研究建立诊断方法的优势 | 第47-48页 |
| 第三章 猪链球菌2型病原体抗体检测蛋白芯片的研制 | 第48-64页 |
| 1 材料与方法 | 第48-52页 |
| 1.1 材料 | 第48-50页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第48页 |
| 1.1.2 试剂和血清 | 第48-49页 |
| 1.1.3 THY培养基以及ELISA用溶液的配制 | 第49页 |
| 1.1.3.1 THY培养基 | 第49页 |
| 1.1.3.2 ELISA用溶液 | 第49页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第49页 |
| 1.1.5 引物的设计与合成 | 第49-50页 |
| 1.2 方法 | 第50-52页 |
| 1.2.1 重组抗原的表达 | 第50-51页 |
| 1.2.2 重组抗原的纯化 | 第51页 |
| 1.2.3 ELISA-array蛋白芯片初步筛选重组抗原 | 第51页 |
| 1.2.4 猪免疫血清筛选重组抗原实验 | 第51页 |
| 1.2.5 猪感染血清筛选重组抗原实验 | 第51页 |
| 1.2.6 临床阳性血清样本验证实验 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-62页 |
| 2.1 重组蛋白的表达形式鉴定 | 第52页 |
| 2.2 重组蛋白的纯化 | 第52-54页 |
| 2.3 兔抗血清初筛抗原结果 | 第54-56页 |
| 2.4 猪免疫血清蛋白芯片反应结果 | 第56-59页 |
| 2.5 猪感染血清芯片反应结果 | 第59-61页 |
| 2.6 临床样本验证实验结果 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 3.1 蛋白检测芯片对抗原纯度的要求 | 第62-63页 |
| 3.2 抗原模拟样本筛选与临床样本检测结果对比分析 | 第63页 |
| 3.3 临床阳性血清样本抗体检测结果分析 | 第63-64页 |
| 第四章 全文总结 | 第64-66页 |
| 1 ELISA-array蛋白芯片技术初步筛选出9个病毒和5个猪链球菌2型特异和敏感的抗原 | 第64页 |
| 2 采用传统ELISA方法对备选抗原的特异性和灵敏度进行了证实 | 第64-65页 |
| 3 用于检测六种虫媒病毒抗体的ELISA-array蛋白芯片具有良好的检测灵敏度和特异性 | 第65页 |
| 4 用于检测猪链球菌2型抗体的ELISA-array蛋白芯片具有良好的检测灵敏度和特异性 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录1 常用缓冲液及溶液的配置 | 第70-75页 |
| 附录Ⅱ 在读硕士期间发表文章 | 第75页 |
