| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第16-32页 |
| 1.1 课题的学术背景及研究的目的和意义 | 第16页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第16-30页 |
| 1.2.1 缬草提取物的化学成分 | 第16-17页 |
| 1.2.2 环烯醚萜三酯的药理活性 | 第17-18页 |
| 1.2.3 环烯醚萜三酯的分离和鉴定 | 第18-20页 |
| 1.2.4 缬草属细胞和组织培养体系研究现状 | 第20-22页 |
| 1.2.5 响应面法在培养体系优化中的研究进展 | 第22页 |
| 1.2.6 高产细胞系的筛选 | 第22-23页 |
| 1.2.7 细胞培养动力学模型 | 第23-26页 |
| 1.2.8 环烯醚萜类化合物代谢途径、关键酶及其编码基因的研究进展 | 第26-29页 |
| 1.2.9 代谢调控在次生代谢产物生物合成上的应用 | 第29-30页 |
| 1.3 目前研究中面临的问题及解决方法 | 第30-31页 |
| 1.4 研究内容 | 第31-32页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第32-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-35页 |
| 2.1.1 缬草种类 | 第32页 |
| 2.1.2 培养基 | 第32-33页 |
| 2.1.3 试验试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.2 缬草挥发油主要化学活性成分分析 | 第35-36页 |
| 2.2.1 挥发油提取 | 第35页 |
| 2.2.2 GC–MS分析挥发油成分 | 第35-36页 |
| 2.2.3 超声辅助提取环烯醚萜三酯 | 第36页 |
| 2.2.4 HPLC外标法检测环烯醚萜三酯含量 | 第36页 |
| 2.3 缬草无菌苗的培养 | 第36页 |
| 2.4 缬草愈伤组织和不定根固体培养体系的建立 | 第36-38页 |
| 2.4.1 不同外植体和基础培养基的筛选 | 第36-37页 |
| 2.4.2 不同激素配比对于愈伤和不定根诱导的影响 | 第37页 |
| 2.4.3 不定根固体培养体系的建立 | 第37-38页 |
| 2.5 缬草细胞悬浮培养体系的建立 | 第38页 |
| 2.5.1 细胞生物量和培养液pH值的测定 | 第38页 |
| 2.5.2 悬浮细胞培养物的缬草素含量分析 | 第38页 |
| 2.5.3 激素组合的筛选 | 第38页 |
| 2.6 缬草不定根悬浮培养体系的建立 | 第38-39页 |
| 2.6.1 不定根悬浮培养激素优化 | 第38页 |
| 2.6.2 不定根悬浮培养体系的建立 | 第38-39页 |
| 2.7 生物合成缬草素条件优化 | 第39-40页 |
| 2.7.1 继代时间对生物量和缬草素含量的影响 | 第39页 |
| 2.7.2 培养温度对生物量和缬草素含量的影响 | 第39页 |
| 2.7.3 摇床转速对生物量和缬草素含量的影响 | 第39页 |
| 2.7.4 应用Plackett–Burman试验设计对培养参数筛选 | 第39页 |
| 2.7.5 应用Box–Behnken试验设计的响应面优化 | 第39-40页 |
| 2.7.6 试验拟合模型的验证 | 第40页 |
| 2.8 缬草素生物合成调控因子优化 | 第40-41页 |
| 2.8.1 试验用不定根材料的均质化培养 | 第40页 |
| 2.8.2 诱导子和前体化合物的预处理 | 第40页 |
| 2.8.3 诱导子和前体化合物的筛选 | 第40-41页 |
| 2.8.4 响应面优化试验 | 第41页 |
| 2.8.5 最优浓度组合诱导子的不同诱导时间对缬草素合成的影响 | 第41页 |
| 2.8.6 试验数据统计学分析 | 第41页 |
| 2.9 缬草dxr基因的克隆和表达 | 第41-44页 |
| 2.9.1 dxr基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 2.9.2 RT-PCR反应体系及条件 | 第42页 |
| 2.9.3 PCR产物回收、克隆 | 第42页 |
| 2.9.4 黑水缬草dxr基因的原核表达 | 第42页 |
| 2.9.5 黑水缬草dxr基因组织特异性及调控因子对基因表达量的影响 | 第42-44页 |
| 第3章 缬草中主要化学活性成分分析 | 第44-54页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 缬草挥发油的提取 | 第44-45页 |
| 3.3 缬草挥发油GC-MS分析 | 第45-49页 |
| 3.4 HPLC外标法检测环烯醚萜三酯含量 | 第49-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第4章 缬草素合成高产细胞培养体系的筛选 | 第54-65页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 不同外植体诱导愈伤组织细胞系的生物量分析 | 第54-56页 |
| 4.3 培养基对诱导率和生长量的影响 | 第56-57页 |
| 4.4 激素对诱导率和生长量的影响 | 第57-63页 |
| 4.4.1 激素对愈伤组织和不定根诱导率和生长量的影响 | 第58-61页 |
| 4.4.2 激素对悬浮细胞培养生长量的影响 | 第61-62页 |
| 4.4.3 激素对悬浮不定根培养生长量的影响 | 第62-63页 |
| 4.5 不同细胞系的缬草素含量分析 | 第63-64页 |
| 4.6 本章小结 | 第64-65页 |
| 第5章 生物合成缬草素条件优化及动力学模型建立 | 第65-85页 |
| 5.1 引言 | 第65页 |
| 5.2 培养条件对细胞生长和缬草素合成的影响 | 第65-68页 |
| 5.2.1 培养时间对细胞生长和缬草素合成的影响 | 第65-66页 |
| 5.2.2 培养温度对细胞生长和缬草素合成的影响 | 第66-67页 |
| 5.2.3 摇床转速对细胞生长和缬草素合成的影响 | 第67-68页 |
| 5.3 培养参数中的主因素筛选 | 第68-71页 |
| 5.4 Box–Behnken试验设计的响应面优化 | 第71-75页 |
| 5.5 缬草不定根悬浮培养的动力学曲线 | 第75-77页 |
| 5.6 动力学模型的建立 | 第77-83页 |
| 5.6.1 不定根组织生长动力学模型 | 第77-79页 |
| 5.6.2 缬草素合成动力学模型 | 第79-82页 |
| 5.6.3 基质消耗动力学模型 | 第82-83页 |
| 5.7 本章小结 | 第83-85页 |
| 第6章 调控因子对缬草素合成和dxr基因表达的影响 | 第85-108页 |
| 6.1 引言 | 第85页 |
| 6.2 不定根组织均质化培养 | 第85-86页 |
| 6.3 诱导子对缬草素合成的影响 | 第86-91页 |
| 6.3.1 壳聚糖对缬草素合成的影响 | 第86-87页 |
| 6.3.2 茉莉酸甲酯对缬草素合成的影响 | 第87-88页 |
| 6.3.3 茉莉酸对缬草素合成的影响 | 第88-89页 |
| 6.3.4 其它诱导子对缬草素合成的影响 | 第89-91页 |
| 6.4 缬草素合成前体香茅醛对缬草素合成的影响 | 第91-92页 |
| 6.5 响应面优化试验 | 第92-98页 |
| 6.6 最优诱导子浓度组合的不同处理时间对缬草素的影响 | 第98页 |
| 6.7 RNA提取 | 第98-99页 |
| 6.8 dxr基因克隆及序列分析 | 第99-100页 |
| 6.9 DXR蛋白质序列的同源性分析 | 第100-102页 |
| 6.10 黑水缬草dxr基因的原核表达 | 第102-103页 |
| 6.11 黑水缬草dxr基因组织表达特征分析 | 第103-104页 |
| 6.12 调控因子对dxr基因表达的影响 | 第104-106页 |
| 6.13 本章小结 | 第106-108页 |
| 结论 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-121页 |
| 附录 | 第121-128页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 个人简历 | 第131页 |
