| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 绪论 | 第13-31页 |
| 1.1 乳腺癌内分泌治疗耐药研究进展 | 第13-20页 |
| 1.1.1 雌激素受体与乳腺癌内分泌治疗分子基础 | 第13-17页 |
| 1.1.2 乳腺癌内分泌治疗耐药形成机制 | 第17-20页 |
| 1.2 MED1及其与乳腺癌关系的研究进展 | 第20-24页 |
| 1.2.1 MED1结构功能概况 | 第20-23页 |
| 1.2.2 MED1与乳腺癌细胞生长 | 第23-24页 |
| 1.2.3 MED1与乳腺癌TAM治疗耐药 | 第24页 |
| 1.3 基质金属蛋白酶相关的乳腺癌侵袭转移机制研究 | 第24-29页 |
| 1.3.1 乳腺癌侵袭转移研究概况 | 第24-25页 |
| 1.3.2 MMPs及其在乳腺癌转移中的作用 | 第25-29页 |
| 1.4 本论文的立题依据 | 第29-31页 |
| 第2章 可诱导型MED1沉默乳腺癌细胞株的建立 | 第31-53页 |
| 2.1 引言 | 第31-32页 |
| 2.2 材料与方法 | 第32-42页 |
| 2.2.1 主要试剂与材料 | 第32-34页 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 | 第34页 |
| 2.2.3 胞培养 | 第34-35页 |
| 2.2.4 菌培养基 | 第35页 |
| 2.2.5 pLKO-Tet-On-MED1/GFP shRNA质粒的构建 | 第35-38页 |
| 2.2.6 包装慢病毒载体系统 | 第38页 |
| 2.2.7 筛选单克隆稳定细胞株 | 第38-39页 |
| 2.2.8 验证分析稳定克隆内shRNA诱导表达情况 | 第39页 |
| 2.2.9 蛋白免疫印迹(Western blotting) | 第39-40页 |
| 2.2.10 MTT细胞增殖实验 | 第40-41页 |
| 2.2.11 细胞克隆形成实验 | 第41页 |
| 2.2.12 软琼脂克隆形成实验 | 第41-42页 |
| 2.2.13 细胞周期分析 | 第42页 |
| 2.2.14 统计分析方法 | 第42页 |
| 2.3 结果 | 第42-51页 |
| 2.3.1 pLKO-Tet-On shMED1/shGFP质粒的构建 | 第42-45页 |
| 2.3.2 可诱导型MED1沉默乳腺癌细胞株的筛选 | 第45-47页 |
| 2.3.3 可诱导型MED1沉默乳腺癌细胞株生长特性分析 | 第47-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-52页 |
| 2.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第3章 MED1对乳腺癌Fulvestrant治疗耐药的调控机制 | 第53-82页 |
| 3.1 引言 | 第53-54页 |
| 3.2 材料与方法 | 第54-63页 |
| 3.2.1 主要试剂与材料 | 第54-55页 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 | 第55-56页 |
| 3.2.3 细胞培养 | 第56页 |
| 3.2.4 蛋白免疫印迹 | 第56页 |
| 3.2.5 MTT细胞增殖实验 | 第56页 |
| 3.2.6 细胞周期分析 | 第56-57页 |
| 3.2.7 RNA提取、逆转录及荧光定量PCR | 第57-58页 |
| 3.2.8 染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecpitation,ChIP)实验 | 第58-59页 |
| 3.2.9 裸鼠乳腺癌原位移植实验 | 第59-60页 |
| 3.2.10 苏木素&伊红(H&E)染色 | 第60-61页 |
| 3.2.11 免疫组化(Immunohistochemical,IHC)染色 | 第61-63页 |
| 3.2.12 统计分析方法 | 第63页 |
| 3.3 结果 | 第63-79页 |
| 3.3.1 沉默MED1增强体外乳腺癌细胞Fulvestrant药物处理敏感性 | 第63-66页 |
| 3.3.2 沉默MED1促进Fulvestrant诱导的乳腺癌细胞周期阻滞 | 第66-68页 |
| 3.3.3 沉默MED1促进Fulvestrant介导的ER靶基因表达抑制 | 第68-70页 |
| 3.3.4 MED1与HER2通路的相互调控环参与Fulvestrant耐药形成 | 第70-72页 |
| 3.3.5 沉默MED1调节Fulvestrant对RNA polⅡ和HDAC1招募的影响 | 第72-74页 |
| 3.3.6 下调MED1增强乳腺癌细胞裸鼠原位移植瘤Fulvestrant敏感性 | 第74-77页 |
| 3.3.7 下调MED1增强Fulvestrant对裸鼠原位移植瘤细胞增殖的抑制作用 | 第77-78页 |
| 3.3.8 下调MED1增强Fulvestrant对原位移植瘤ER靶基因表达的抑制作用 | 第78-79页 |
| 3.4 讨论 | 第79-81页 |
| 3.5 本章小结 | 第81-82页 |
| 第4章 MED1对乳腺癌侵袭转移的调控机制 | 第82-121页 |
| 4.1 引言 | 第82-83页 |
| 4.2 材料与方法 | 第83-93页 |
| 4.2.1 主要试剂与材料 | 第83-85页 |
| 4.2.2 主要仪器和设备 | 第85页 |
| 4.2.3 细胞培养 | 第85-86页 |
| 4.2.4 质粒及表达载体 | 第86页 |
| 4.2.5 蛋白免疫印迹 | 第86页 |
| 4.2.6 RNA提取、逆转录及荧光定量PCR | 第86页 |
| 4.2.7 划痕愈合实验(Wound-Healing Assay) | 第86-87页 |
| 4.2.8 细胞迁移实验(Cell Migration Assay) | 第87页 |
| 4.2.9 细胞侵袭实验(Cell Invasion Assay) | 第87-88页 |
| 4.2.10 细胞黏附实验(Cell Adhesion Assay) | 第88-89页 |
| 4.2.11 明胶酶谱实验(Gelatin Zymography Assay) | 第89-90页 |
| 4.2.12 免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)实验 | 第90-91页 |
| 4.2.13 瞬时转染及外源性MMP9启动子荧光素酶报告基因实验 | 第91页 |
| 4.2.14 染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验 | 第91-92页 |
| 4.2.15 裸鼠乳腺癌原位移植实验 | 第92-93页 |
| 4.2.16 裸鼠尾静脉注射肺部转移实验 | 第93页 |
| 4.2.17 统计分析方法 | 第93页 |
| 4.3 结果 | 第93-116页 |
| 4.3.1 沉默MED1抑制乳腺癌细胞体外迁移侵袭能力 | 第93-96页 |
| 4.3.2 沉默MED1抑制乳腺癌细胞MMP9的表达与活性 | 第96-100页 |
| 4.3.3 外源性MMP9可以重建由MED1沉默所抑制的细胞侵袭能力 | 第100-101页 |
| 4.3.4 过表达MED1增强乳腺癌细胞MMP9表达及迁移侵袭能力 | 第101-105页 |
| 4.3.5 沉默MED1抑制乳腺癌细胞裸鼠原位移植瘤的体内转移能力 | 第105-106页 |
| 4.3.6 沉默MED1抑制乳腺癌细胞裸鼠原位移植瘤的MMP9表达 | 第106-108页 |
| 4.3.7 沉默MED1抑制乳腺癌细胞经静脉注射肺转移能力 | 第108-109页 |
| 4.3.8 MED1通过AP-1结合位点激活MMP9启动子活性 | 第109-111页 |
| 4.3.9 MED1通过AP-1调控乳腺癌细胞内源性MMP9转录 | 第111-113页 |
| 4.3.10 MED1对HDAC1和CBP招募的调节作用参与了MMP9转录调控 | 第113-114页 |
| 4.3.11 MED1对MMP9的转录调控受ER-雌激素影响 | 第114-116页 |
| 4.4 讨论 | 第116-119页 |
| 4.5 本章小结 | 第119-121页 |
| 第5章 研究成果与展望 | 第121-123页 |
| 5.1 本论文主要研究成果 | 第121-122页 |
| 5.2 本论文不足之处及对后续研究的展望 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-137页 |
| 攻读博士学位期间主要的研究成果 | 第137-138页 |
| 缩略词一览 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
