提要 | 第4-7页 |
中文摘要 | 第7-10页 |
Abstract | 第10-13页 |
前言 | 第17-19页 |
第1章 综述 | 第19-39页 |
1.1 组蛋白乙酰基转移酶(HAT)与肿瘤 | 第19-32页 |
1.1.1 组蛋白乙酰基转移酶的分类和结构 | 第19-21页 |
1.1.2 组蛋白乙酰基转移酶的功能 | 第21-25页 |
1.1.3 组蛋白乙酰基转移酶的研究方法 | 第25页 |
1.1.4 组蛋白乙酰基转移酶在肿瘤发生发展中的作用 | 第25-32页 |
1.1.4.1 赖氨酸乙酰化:染色体解聚进行基因转录 | 第25-27页 |
1.1.4.2 组蛋白乙酰基转移酶在癌症中的双重作用 | 第27-28页 |
1.1.4.3 组蛋白乙酰基转移酶作为肿瘤抑制因子 | 第28-29页 |
1.1.4.4 组蛋白乙酰基转移酶作为致癌基因 | 第29-31页 |
1.1.4.5 组蛋白乙酰基转移酶作为生物标志物 | 第31-32页 |
1.2 RNAI 筛选在肿瘤基因治疗的研究现状及进展 | 第32-39页 |
1.2.1 SIRNA 文库在肿瘤治疗方面的应用 | 第34-35页 |
1.2.2 治疗的挑战 | 第35-36页 |
1.2.3 SIRNA 治疗的进展 | 第36-39页 |
第2章 材料和方法 | 第39-73页 |
2.1 实验材料 | 第39-42页 |
2.1.1 主要试剂 | 第39页 |
2.1.2 主要仪器 | 第39-40页 |
2.1.3 质粒和菌株 | 第40页 |
2.1.4 细胞株 | 第40页 |
2.1.5 主要试剂的配制 | 第40-42页 |
2.2. 实验方法 | 第42-71页 |
2.2.1 制备人乙酰基转移酶(HAT)RNAi 慢病毒文库 | 第42-61页 |
2.2.2 shRNA 慢病毒包装 | 第61-63页 |
2.2.3 慢病毒感染目的细胞 | 第63-64页 |
2.2.4 MTS 检测 | 第64页 |
2.2.5 肺癌相关基因筛选 | 第64-65页 |
2.2.6 有效 shRNA 靶点筛查 | 第65-68页 |
2.2.7 FACS 检测细胞周期的改变 | 第68-69页 |
2.2.8 Western blot 检测细胞增殖周期相关蛋白 | 第69-71页 |
2.3 统计学处理 | 第71-73页 |
第3章 结果 | 第73-92页 |
3.1 人乙酰基转移酶(HAT)RNAI 慢病毒文库 | 第73-82页 |
3.1.1 重组质粒的鉴定 | 第73-76页 |
3.1.1.1 表达人乙酰基转移酶 shRNA 重组质粒的 PCR 鉴定 | 第73-75页 |
3.1.1.2 表达人乙酰基转移酶 shRNA 重组质粒的酶切鉴定 | 第75-76页 |
3.1.2 阳性人乙酰基转移酶 shRNA 重组质粒慢病毒包装 | 第76-79页 |
3.1.3 人乙酰基转移酶 shRNA 慢病毒文库感染 A549 细胞 | 第79-82页 |
3.2 RNAI 筛选 | 第82-85页 |
3.2.1 A549 细胞中 HATs 慢病毒库 MTS 筛选结果 | 第82-85页 |
3.3 KAT8 SHRNA 有效片段的筛选 | 第85-87页 |
3.3.1 KAT8 基因 shRNA 质粒转染 293T 细胞的转染效率 | 第85-86页 |
3.3.2 KAT8 shRNA 慢病毒感染 A549 细胞感染效率 | 第86页 |
3.3.3 KAT8 shRNA 慢病毒对 A549 细胞增殖的影响 | 第86-87页 |
3.4 KAT8 沉默效率检测 | 第87-89页 |
3.4.1 KAT8 沉默后 A549 细胞 KAT8 mRNA 表达情况 | 第87-88页 |
3.4.2 qPCR 检测基因 KAT8 的沉默效率 | 第88页 |
3.4.3 KAT8 沉默后 A549 细胞 KAT8 蛋白表达情况 | 第88-89页 |
3.5 阳性基因功能研究 | 第89-92页 |
3.5.1 FACS 检测细胞周期改变 | 第89-90页 |
3.5.2 Western blot 检测 KAT8 沉默后对细胞周期相关蛋白表达的影响 | 第90-92页 |
第4章 讨论 | 第92-99页 |
结论 | 第99-101页 |
参考文献 | 第101-117页 |
攻读博士期间发表文章 | 第117-119页 |
致谢 | 第119页 |