| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-32页 |
| 1. 乙型脑炎病毒研究进展 | 第12-20页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·分类及分型 | 第13-14页 |
| ·乙脑病毒对细胞和动物敏感性 | 第14页 |
| ·乙脑实验诊断技术 | 第14-15页 |
| ·分子生物学 | 第15-20页 |
| 2. 乙型脑炎疫苗的研究进展 | 第20-27页 |
| ·乙脑灭活疫苗 | 第20页 |
| ·乙脑减毒活疫苗 | 第20-22页 |
| ·乙脑基因工程疫苗 | 第22-27页 |
| 3. 增强DNA疫苗免疫效果的研究进展 | 第27-32页 |
| ·目的基因的选择与修饰 | 第27-30页 |
| ·DNA疫苗载体的优化 | 第30-31页 |
| ·DNA疫苗免疫接种途径与方法的优化 | 第31页 |
| ·利用细胞因子佐剂提高DNA疫苗的有效性 | 第31-32页 |
| 研究目的与意义 | 第32-33页 |
| 第二部分 试验研究 | 第33-69页 |
| 第一章 乙型脑炎病毒prMΔE基因的克隆与TPA信号肽序列的制备及真核表达质粒的构建 | 第33-55页 |
| 1. 材料 | 第33-35页 |
| ·毒株、菌株、质粒和细胞 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·试剂配制 | 第33-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 2. 方法 | 第35-46页 |
| ·技术路线 | 第35-36页 |
| ·prMΔE基因扩增用引物设计 | 第36页 |
| ·JEV的增殖 | 第36页 |
| ·JEV RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·JEV prMΔE基因RT-PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·JEV prMΔE基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·JEV prMΔE基因T-A克隆质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·prMΔE主要抗原表位基因核苷酸序列测定与分析 | 第40-41页 |
| ·prMΔE基因表达质粒PVAX-prMΔE的构建 | 第41页 |
| ·TPA信号肽序列的制备 | 第41-43页 |
| ·重组质粒PVAX-TPA-prMΔE的构建 | 第43页 |
| ·重组真核表达质粒的体外表达 | 第43-46页 |
| 3. 结果与分析 | 第46-53页 |
| ·日本乙型脑炎病毒的增殖 | 第46页 |
| ·JEV prMΔE基因的RT-PCR结果 | 第46页 |
| ·JEV prMΔE基因T-A克隆的菌落PCR以及酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·prMΔE目的基因的测序及分析结果 | 第47-49页 |
| ·重组质粒PVAX-prMΔE的酶切及菌落PCR鉴定结果 | 第49-50页 |
| ·TPA信号肽序列的PCR扩增结果 | 第50页 |
| ·TPA信号肽序列T-A克隆质粒的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·TPA信号肽序列的测序结果 | 第51页 |
| ·重组质粒PVAX-TPA-prMΔE的酶切及菌落PCR鉴定结果 | 第51-52页 |
| ·构建的两种真核表达质粒表达检测结果 | 第52-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-54页 |
| 5. 小结 | 第54-55页 |
| 第二章 JEV DNA疫苗免疫原性的研究 | 第55-69页 |
| 1. 引言 | 第55页 |
| 2. 材料 | 第55-57页 |
| ·质粒和病毒 | 第55-56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·试验动物 | 第56页 |
| ·试剂配制 | 第56-57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57页 |
| 3. 方法 | 第57-61页 |
| ·JEV DNA疫苗的制备 | 第57-59页 |
| ·JEV DNA疫苗肌肉注射小鼠免疫原性的研究 | 第59-60页 |
| ·JEV DNA疫苗保护效率的测定 | 第60-61页 |
| 4. 结果与分析 | 第61-64页 |
| ·JEV DNA疫苗用质粒纯度的鉴定结果 | 第61页 |
| ·JEV DNA疫苗免疫后特异性抗JEV血清IgG抗体和的检测结果 | 第61-62页 |
| ·不同质粒免疫小鼠脾T淋巴细胞特异性增殖检测结果 | 第62-63页 |
| ·免疫后小鼠攻毒实验结果 | 第63-64页 |
| 5. 讨论 | 第64-68页 |
| ·目的基因的选择 | 第64-65页 |
| ·表达载体的选择 | 第65页 |
| ·关于TPA信号肽序列 | 第65-66页 |
| ·转染的方法 | 第66-67页 |
| ·核酸疫苗免疫效果 | 第67-68页 |
| 6. 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附件材料 | 第79页 |
