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登革热流行病学调查及重症登革热病理机制研究

摘要第6-8页
Abstract第8-9页
第一部分 登革热分子流行病学研究第10-55页
    前言第10-11页
    1 登革病毒的生物学特征第11-14页
        1.1 登革病毒的分子结构和基因组第11-12页
        1.2 登革病毒的复制和传播途径第12-14页
        1.3 世界范围内登革热的流行概况第14页
    2 中国历年登革热流行情况的回顾性研究第14-27页
        2.1 研究方法概述第14-17页
        2.2 中国历年登革热的地理分布第17-20页
        2.3 中国历年登革热的时间分布第20-21页
        2.4 中国历年登革热的人口分布第21-23页
        2.5 中国历年登革热的型别分布第23页
        2.6 中国历年登革热流行株的进化发育研究第23-27页
    3 云南省西双版纳州登革热分子流行病学研究第27-50页
        3.1 概述第27-29页
        3.2 材料与方法第29-34页
        3.3 2013年西双版纳州登革热流行病学研究第34-42页
        3.4 2015年西双版纳州登革热流行病学研究第42-50页
    讨论第50-55页
第二部分 重症登革热临床病理观察第55-71页
    前言第55-56页
    1 研究背景及实验思路第56-58页
    2 材料与方法第58-63页
        2.1 临床研究设计及参与者招募第58页
        2.2 实验材料第58-59页
        2.3 实验方法第59-63页
    3 结果第63-68页
        3.1 登革热血清中非结构蛋白NS1含量检测第63-64页
        3.2 登革热血清样本的常规血液指标检测结果第64页
        3.3 登革热血清中登革热病毒载量检测第64-66页
        3.4 登革热血清中免疫球蛋白IgG/IgM/IgA水平检测第66-67页
        3.5 登革热血清中补体C3/C4水平检测第67-68页
    讨论第68-71页
第三部分 补体与重症登革热的相关性研究第71-84页
    前言第71-75页
    1 材料与方法第75-78页
        1.1 白纹伊蚊细胞培养第75页
        1.2 登革病毒毒株扩增及鉴定第75页
        1.3 收获病毒液的滴度测定第75-76页
        1.4 人血清抗体依赖增强补体裂解模型的建立第76页
        1.5 人全血抗体依赖增强感染模型的建立第76页
        1.6 免疫比浊法测定补体C3第76-77页
        1.7 C3裂解产物(C3SP)C3a的定量检测第77-78页
        1.8 补体裂解产物C5a、C3bBb、C1q的定量检测第78页
    2 结果第78-82页
        2.1 登革病毒的型别鉴定第78-79页
        2.2 利用人血清建立抗体依赖增强补体裂解模型第79页
        2.3 利用人全血建立ADE模型第79-80页
        2.4 利用人全血ADE模型研究补体活化途径第80-82页
    讨论第82-84页
第四部分 补体旁路途径过度激活导致重症登革热的病理机制研究第84-103页
    前言第84页
    1 材料与方法第84-92页
        1.1 人外周血淋巴细胞(PBMC)分离及培养第84-85页
        1.2 人外周血单核细胞初步纯化(Monocytes)第85页
        1.3 美天旎MAC阴性磁珠分选人外周血单核细胞第85-86页
        1.4 阴性磁珠分选的人外周血单核细胞纯度鉴定第86页
        1.5 人外周血单核细胞培养条件摸索第86-87页
        1.6 人外周血单核细胞抗体依赖增强感染(ADE)模型的建立第87页
        1.7 C3a、C5a含量检测第87页
        1.8 ELISA法定量检测登革热血清中细胞因子IL-10含量第87-88页
        1.9 免疫共沉淀(Co-Immunopredpitation, Co-IP)第88-89页
        1.10 SDS-PAGE鉴定免疫共沉淀收获液第89页
        1.11 质谱鉴定SDS-PAGE中的目标蛋白第89页
        1.12 Western Blot定性验证质谱结果第89-90页
        1.13 利用Transwell细胞培养皿进行单核细胞ADE模型-HuVEC共培养第90-91页
        1.14 免疫荧光染色检测HuVEC表面的补体膜攻击复合物C5b-9第91页
        1.15 伊红染色显示与单核细胞ADE模型共培养后HuVEC细胞骨架改变第91-92页
    2 结果第92-100页
        2.1 流式细胞术鉴定磁珠阴性分选的单核细胞纯度第92页
        2.2 单核细胞最适培养条件第92-94页
        2.3 利用人外周血单核细胞建立抗体依赖增强感染模型第94-96页
        2.4 C3a、C5a、IL-10含量检测第96-97页
        2.5 利用单核细胞ADE模型进行免疫共沉淀第97-98页
        2.6 目标蛋白的质谱鉴定第98-99页
        2.7 Western Blot验证质谱鉴定结果第99页
        2.8 免疫荧光染色检测HuVEC表面的补体膜攻击复合物C5b-9第99-100页
        2.9 伊红染色检测HuVEC的细胞骨架改变第100页
    讨论第100-103页
全文总结第103-112页
参考文献第112-119页
附录第119-125页
致谢第125-126页
个人简历第126-129页

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