| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要符号对照表 | 第10-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-33页 |
| 1.1 生物矿化 | 第12-13页 |
| 1.1.1 生物矿化概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 生物矿化的研究意义 | 第13页 |
| 1.2 合浦珠母贝生物矿化 | 第13-16页 |
| 1.2.1 合浦珠母贝贝壳的结构 | 第13-16页 |
| 1.2.2 合浦珠母贝贝壳的形成机理 | 第16页 |
| 1.3 基质蛋白在贝壳形成中的作用 | 第16-20页 |
| 1.3.1 基质蛋白的种类概述 | 第16-19页 |
| 1.3.2 基质蛋白的功能 | 第19-20页 |
| 1.4 合浦珠母贝基质蛋白基因转录调控的研究进展 | 第20-24页 |
| 1.4.1 NF-кB信号通路调控基质蛋白基因Nacrein的表达 | 第20-21页 |
| 1.4.2 Pf-MSX转录因子调控基质蛋白基因Pif的表达 | 第21-22页 |
| 1.4.3 Pf-AP-1 转录因子调控多种基质蛋白基因的表达 | 第22页 |
| 1.4.4 基质蛋白基因转录调控研究的难点 | 第22-24页 |
| 1.5 转录因子、启动子和基因转录调控 | 第24页 |
| 1.6 POU转录因子家族 | 第24-28页 |
| 1.6.1 POU转录因子家族概述 | 第24-26页 |
| 1.6.2 POU转录因子结构与作用机理 | 第26-27页 |
| 1.6.3 POU转录因子与生物矿化 | 第27-28页 |
| 1.6.4 软体动物POU转录因子研究概况 | 第28页 |
| 1.7 C/EBP转录因子家族 | 第28-31页 |
| 1.7.1 C/EBP转录因子家族概述 | 第28-29页 |
| 1.7.2 C/EBP转录因子结构与作用机理 | 第29-30页 |
| 1.7.3 C/EBP转录因子与生物矿化 | 第30页 |
| 1.7.4 软体动物C/EBP转录因子研究概况 | 第30-31页 |
| 1.8 NF-Y转录因子概述 | 第31页 |
| 1.9 研究目的及意义 | 第31-32页 |
| 1.10 论文结构 | 第32-33页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第33-66页 |
| 2.1 实验动物 | 第33页 |
| 2.2 外套膜总RNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.2 RNA的定量和质量检测 | 第33页 |
| 2.3 转录因子基因c DNA全长的克隆 | 第33-40页 |
| 2.3.1 RACE c DNA模版的合成 | 第33-34页 |
| 2.3.2 转录因子的RACE特异引物的设计 | 第34-36页 |
| 2.3.3 转录因子基因的RACE | 第36-38页 |
| 2.3.4 目的片段回收、连接、转化、鉴定和测序 | 第38-39页 |
| 2.3.5 转录因子基因c DNA全长的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.4 序列分析和进化树构建 | 第40-44页 |
| 2.4.1 序列分析 | 第40页 |
| 2.4.2 进化树构建 | 第40-44页 |
| 2.5 组织分布检测 | 第44-47页 |
| 2.5.1 组织样品c DNA模版的制备 | 第44-45页 |
| 2.5.2 Realtime PCR | 第45-47页 |
| 2.6 基因组DNA的提取 | 第47页 |
| 2.6.1 闭壳肌基因组DNA的提取 | 第47页 |
| 2.6.2 DNA的定量和质量检测 | 第47页 |
| 2.7 基质蛋白基因启动子的克隆 | 第47-50页 |
| 2.7.1 基质蛋白基因Aspein启动子的克隆 | 第47-48页 |
| 2.7.2 基质蛋白基因Prismalin-14 启动子的克隆 | 第48-49页 |
| 2.7.3 基质蛋白基因Shematrin-2 启动子的克隆 | 第49页 |
| 2.7.4 基质蛋白基因ACCBP启动子的克隆 | 第49页 |
| 2.7.5 基质蛋白基因MSI60启动子的克隆 | 第49-50页 |
| 2.7.6 基质蛋白基因N19启动子的克隆 | 第50页 |
| 2.8 细胞转染实验相关载体的构建 | 第50-53页 |
| 2.9 细胞培养 | 第53页 |
| 2.10 细胞转染 | 第53-54页 |
| 2.11 双荧光素酶活性测定 | 第54页 |
| 2.12 Pf-POU2F1和Pf-POU3F4在HEK-293T细胞中的亚定位 | 第54-55页 |
| 2.13 SDS-PAGE及蛋白质免疫印迹 | 第55页 |
| 2.14 多克隆抗体的制备 | 第55-56页 |
| 2.15 EMSA鉴定 | 第56-61页 |
| 2.15.1 细胞核蛋白的提取和测定 | 第56-57页 |
| 2.15.2 EMSA探针的制备 | 第57-58页 |
| 2.15.3 EMSA检测 | 第58-61页 |
| 2.16 Pf-POU3F4的活体RNA干扰实验 | 第61-63页 |
| 2.16.1 ds RNA的合成和纯化 | 第61-62页 |
| 2.16.2 ds RNA的注射和样品采集 | 第62页 |
| 2.16.3 样品基因相对表达量检测 | 第62-63页 |
| 2.17 胚胎幼体发育过程中的基因表达谱检测 | 第63页 |
| 2.18 贝壳棱柱层和珍珠层EDTA可溶和不可溶组分的提取 | 第63-64页 |
| 2.19 间液总蛋白的提取 | 第64页 |
| 2.20 Shematrin-2 的原核重组表达和可溶性蛋白纯化 | 第64-65页 |
| 2.20.1 Shematrin-2 的p MAL-C5X重组载体的构建 | 第64页 |
| 2.20.2 可溶性Shematrin-2 重组蛋白的表达和纯化 | 第64-65页 |
| 2.20.3 p MAL-C5X载体的MBP标签蛋白的表达和纯化 | 第65页 |
| 2.21 体外结晶实验 | 第65页 |
| 2.22 数据处理和分析 | 第65-66页 |
| 第3章 Pf-POU3F4调节Aspein和Prismalin-14 基因的转录 | 第66-92页 |
| 3.1 Pf-POU2F1和Pf-POU3F4基因c DNA全长的克隆和序列分析 | 第66-69页 |
| 3.2 Pf-POU2F1和Pf-POU3F4的进化关系分析 | 第69-71页 |
| 3.3 Pf-POU2F1和Pf-POU3F4的组织分布 | 第71-72页 |
| 3.4 基质蛋白基因Aspein和Prismalin-14 启动子的克隆 | 第72-73页 |
| 3.5 Aspein和Prismalin-14 基因启动子的基础活性检测 | 第73-74页 |
| 3.6 Pf-POU2F1和Pf-POU3F4定位于HEK-293T的细胞核 | 第74-75页 |
| 3.7 Pf-POU3F4对Aspein和Prismalin-14 启动子活性的激活作用 | 第75-78页 |
| 3.8 Pf-POU3F4结构域完整性对激活作用的影响 | 第78-80页 |
| 3.9 Pf-POU3F4多克隆抗体的制备 | 第80-81页 |
| 3.10 Aspein基因启动子上Pf-POU3F4激活的关键区域鉴定 | 第81-83页 |
| 3.11 Prismalin-14 基因启动子上Pf-POU3F4激活的关键区域鉴定 | 第83-86页 |
| 3.12 Pf-POU3F4的体内干扰实验 | 第86-87页 |
| 3.13 胚胎幼体发育过程中的基因表达谱检测 | 第87-88页 |
| 3.14 讨论 | 第88-90页 |
| 3.15 小结 | 第90-92页 |
| 第4章 Pf-C/EBP-A和Pf-C/EBP-B调节Shematrin-2 基因的转录 | 第92-114页 |
| 4.1 C/EBPs和NF-Y转录因子基因c DNA全长的克隆和序列分析 | 第92-98页 |
| 4.2 C/EBPs和NF-Y的进化关系分析 | 第98-101页 |
| 4.3 C/EBPs和NF-Y的组织分布 | 第101-102页 |
| 4.4 胚胎幼体发育过程中的基因表达谱检测 | 第102-103页 |
| 4.5 四种基质蛋白基因启动子的克隆 | 第103-104页 |
| 4.6 四种基质蛋白基因启动子的基础活性检测 | 第104-105页 |
| 4.7 Shematrin-2 多克隆抗体的制备 | 第105-106页 |
| 4.8 Shematrin-2 蛋白在贝壳和间液中的分布 | 第106页 |
| 4.9 Shematrin-2 可溶性蛋白的纯化 | 第106-107页 |
| 4.10 Shematrin-2 的体外结晶实验 | 第107-110页 |
| 4.11 Pf-C/EBP-A和Pf-C/EBP-B激活Shematrin-2 基因启动子活性 | 第110-111页 |
| 4.12 讨论 | 第111-112页 |
| 4.13 小结 | 第112-114页 |
| 第5章 Pf-C/EBP-A和Pf-C/EBP-B参与多种基质蛋白基因转录 | 第114-118页 |
| 5.1 Pf-C/EBP-A激活多种基质蛋白基因启动子活性 | 第114-115页 |
| 5.2 Pf-C/EBP-B激活多种基质蛋白基因启动子活性 | 第115-117页 |
| 5.3 讨论 | 第117页 |
| 5.4 小结 | 第117-118页 |
| 第6章 结论与展望 | 第118-124页 |
| 6.1 结论 | 第118-120页 |
| 6.2 展望 | 第120-124页 |
| 6.2.1 基质蛋白Shematrin-2 功能的深入探究 | 第120页 |
| 6.2.2 Pf-POU3F4转录因子调控基质蛋白基因转录的分子机制 | 第120-121页 |
| 6.2.3 Pf-C/EBP-A和Pf-C/EBP-B转录因子与贝壳形成 | 第121-122页 |
| 6.2.4 贝壳形成相关的基因调控网络 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-138页 |
| 致谢 | 第138-140页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第140页 |
