| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 涡虫简介 | 第10-11页 |
| 1.1.1 形态特征 | 第10页 |
| 1.1.2 生活习性 | 第10页 |
| 1.1.3 生殖方式 | 第10-11页 |
| 1.2 涡虫分子生物学研究 | 第11-12页 |
| 1.2.1 涡虫与再生 | 第11页 |
| 1.2.2 涡虫与wnt信号通路 | 第11-12页 |
| 1.2.3 涡虫体内的干细胞 | 第12页 |
| 1.3 miRNA概述 | 第12-15页 |
| 1.3.1 miRNA特征 | 第12-13页 |
| 1.3.2 miRNA形成及功能 | 第13-14页 |
| 1.3.3 miRNA靶基因预测 | 第14页 |
| 1.3.4 miRNA靶验证 | 第14页 |
| 1.3.5 miRNA功能研究方法 | 第14-15页 |
| 1.4 miRNA与再生 | 第15-16页 |
| 1.5 涡虫再生相关基因研究 | 第16页 |
| 1.6 涡虫体内miRNA的研究 | 第16-17页 |
| 1.7 let-7 家族研究进展 | 第17-19页 |
| 1.7.1 let-7 对干细胞的调控 | 第17-18页 |
| 1.7.2 let-7 对肿瘤的调控 | 第18-19页 |
| 1.8 研究目标与研究内容 | 第19-20页 |
| 1.8.1 研究目标 | 第19页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-48页 |
| 2.1 材料和仪器 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株和实验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.3 其他试剂合成及配制 | 第21-24页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.5 原位杂交和RNA提取耗材的准备和处理 | 第25页 |
| 2.2 实验技术路线 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-48页 |
| 2.3.1 Let-7 功能研究 | 第26-33页 |
| 2.3.1.1 过表达miRNA | 第26页 |
| 2.3.1.2 let-7 原位杂交 | 第26-27页 |
| 2.3.1.3 对有表型的涡虫进行marker基因sfrp-1 原位杂交 | 第27-33页 |
| 2.3.1.4 免疫组化 | 第33页 |
| 2.3.2 Let-7 靶基因预测 | 第33页 |
| 2.3.3 let-7 的靶基因验证 | 第33-45页 |
| 2.3.3.1 荧光定量PCR | 第33-36页 |
| 2.3.3.2 构建荧光蛋白表达载体pEGFP-C1-β-catenin-3’UTR并转染细胞 | 第36-44页 |
| 2.3.3.3 转染其它物种let-7a模拟物 | 第44页 |
| 2.3.3.4 Western blot | 第44-45页 |
| 2.3.4 Let-7 靶基因功能研究 | 第45-48页 |
| 2.3.4.1 let-7 靶基因RNA干扰 | 第45-48页 |
| 3 实验结果与分析 | 第48-69页 |
| 3.1 Let-7 功能研究结果分析 | 第48-54页 |
| 3.1.1 let-7 过表达 | 第48页 |
| 3.1.2 Let-7 原位杂交结果分析 | 第48-49页 |
| 3.1.3 头部marker基因sfrp PCR检测结果 | 第49-50页 |
| 3.1.4 构建的T载体菌落PCR检测结果 | 第50页 |
| 3.1.5 构建的T载体序列测定 | 第50-51页 |
| 3.1.6 PMD-19T-sfrp质粒检测 | 第51-52页 |
| 3.1.7 marker基因探针模板检测 | 第52页 |
| 3.1.8 探针检测，斑点检测结果 | 第52-53页 |
| 3.1.9 sfrp原位杂交结果 | 第53页 |
| 3.1.10 免疫组化结果分析 | 第53-54页 |
| 3.2 let-7 靶基因预测 | 第54-55页 |
| 3.3 let-7 靶基因验证 | 第55-66页 |
| 3.3.1 荧光定量PCR结果分析 | 第55-58页 |
| 3.3.1.1 总RNA提取 | 第55-56页 |
| 3.3.1.2 荧光定量PCR数据分析 | 第56-58页 |
| 3.3.2 构建荧光蛋白表达载体结果分析 | 第58-66页 |
| 3.3.2.1 β-catenin-3’UTR目的片段扩增 | 第58-59页 |
| 3.3.2.2 pEGFP-C1质粒提取检测结果 | 第59页 |
| 3.3.2.3 BamH I和Hind Ⅲ双酶切质粒载体酶切结果 | 第59-60页 |
| 3.3.2.4 pEGFP-C1-β-catenin-3’UTR重组质粒菌落PCR检测 | 第60页 |
| 3.3.2.5 pEGFP-C1-β-catenin-3’UTR重组质粒测序结果 | 第60-61页 |
| 3.3.2.6 提取的无内毒素pEGFP-C1-UTR重组质粒琼脂糖胶检测 | 第61-62页 |
| 3.3.2.7 荧光显微镜观察转染结果 | 第62-63页 |
| 3.3.2.8 流式细胞分析结果 | 第63-66页 |
| 3.3.2.9 western blot结果 | 第66页 |
| 3.4 Let-7 预测靶基因干扰结果分析 | 第66-69页 |
| 3.4.1 合成dsRNA的模板检测 | 第66-67页 |
| 3.4.2 体外转录合成dsRNA浓度测定 | 第67页 |
| 3.4.3 let-7 预测靶基因干扰结果 | 第67-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 4.1 let-7 及其靶基因功能研究 | 第69-70页 |
| 4.2 let-7 靶基因预测及验证 | 第70-72页 |
| 5 结论与展望 | 第72-73页 |
| 5.1 结论 | 第72页 |
| 5.2 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附录 | 第82-83页 |
| 个人简历 | 第83页 |
