| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 苦荞与芦丁简介 | 第12页 |
| 1.2 芦丁降解酶研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 植物启动子研究进展 | 第13-19页 |
| 1.3.1 植物启动子的结构 | 第13-14页 |
| 1.3.2 植物启动子的分类 | 第14-16页 |
| 1.3.3 植物启动子的克隆方法 | 第16-18页 |
| 1.3.4 植物启动子的功能分析方法 | 第18-19页 |
| 1.4 原生质体研究进展 | 第19页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 苦荞叶肉细胞原生质体制备条件的优化 | 第21-28页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 仪器 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 叶片的处理 | 第21页 |
| 2.2.2 原生质体的分离 | 第21-22页 |
| 2.2.3 原生质体的纯化 | 第22页 |
| 2.2.4 原生质体的计数 | 第22页 |
| 2.2.5 原生质体的活力测定 | 第22页 |
| 2.2.6 数据处理 | 第22-23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-26页 |
| 2.3.1 酶类组合对苦荞原生质体的影响 | 第23页 |
| 2.3.2 甘露醇对苦荞原生质体的影响 | 第23-24页 |
| 2.3.3 酶解时间对苦荞原生质体的影响 | 第24-25页 |
| 2.3.4 离心速度对苦荞原生质体的影响 | 第25-26页 |
| 2.3.5 原生质体活力检测 | 第26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 苦荞芦丁降解酶基因启动子的克隆及瞬时表达分析 | 第28-43页 |
| 3.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第28页 |
| 3.1.3 工具酶和主要试剂 | 第28页 |
| 3.1.4 仪器 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-37页 |
| 3.2.1 苦荞FtRDE启动子克隆 | 第28-32页 |
| 3.2.2 苦荞FtRDE启动子生物信息学分析 | 第32页 |
| 3.2.3 苦荞FtRDE启动子5'端缺失及重组载体构建 | 第32-34页 |
| 3.2.4 苦荞叶肉细胞原生质体的制备 | 第34页 |
| 3.2.5 PEG-Ca~(2+)介导的原生质体瞬时转化 | 第34-35页 |
| 3.2.6 荧光素酶活性检测 | 第35页 |
| 3.2.7 数据处理 | 第35页 |
| 3.2.8 qRT-PCR分析FtRDE表达量 | 第35-36页 |
| 3.2.9 FtRDE组织表达特异性分析 | 第36-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.3.1 FtRDE启动子的克隆及生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 3.3.2 FtRDE启动子重组载体的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.3 FtRDE启动子重组载体转化原生质体瞬时表达分析 | 第39-40页 |
| 3.3.4 MeJA和ABA胁迫处理后FtRDE表达量分析 | 第40-41页 |
| 3.3.5 FtRDE组织表达特异性分析 | 第41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 苦荞芦丁降解酶基因过表达及干扰载体的构建 | 第43-50页 |
| 4.1 材料 | 第43页 |
| 4.1.1 材料 | 第43页 |
| 4.1.2 菌株和载体 | 第43页 |
| 4.1.3 工具酶和主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.4 仪器 | 第43页 |
| 4.2 方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 苦荞RNA的提取 | 第43页 |
| 4.2.2 反转录获得cDNA | 第43页 |
| 4.2.3 FtRDE过表达及干扰片段的克隆 | 第43-44页 |
| 4.2.4 FtRDE过表达及干扰片段胶回收 | 第44-45页 |
| 4.2.5 FtRDE过表达、干扰片段及载体双酶切 | 第45页 |
| 4.2.6 FtRDE过表达、干扰片段与载体连接 | 第45-46页 |
| 4.2.7 连接产物转化大肠杆菌TOP10感受态细胞 | 第46页 |
| 4.2.8 FtRDE过表达及干扰载体的鉴定 | 第46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-49页 |
| 4.3.1 FtRDE过表达及干扰片段的克隆 | 第46-47页 |
| 4.3.2 FtRDE过表达及干扰载体的鉴定 | 第47-49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-50页 |
| 第五章 结论与展望 | 第50-51页 |
| 5.1 结论 | 第50页 |
| 5.2 展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录 | 第58-63页 |
| 缩略词 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
