| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 植物乳杆菌的生理功能及其应用 | 第12页 |
| 1.2 D-塔格糖研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 D塔格糖的理化性质与作用 | 第12-13页 |
| 1.2.2 D-塔格糖的代谢 | 第13-14页 |
| 1.2.3 D-塔格糖的制取方法 | 第14页 |
| 1.2.4 L-AI酶法制备D-塔格糖 | 第14-15页 |
| 1.3 乳酸乳球菌食品级诱导表达载体pRNA48 | 第15-16页 |
| 1.4 重组PCR技术 | 第16-17页 |
| 1.4.1 重组PCR三大分支 | 第16-17页 |
| 1.4.2 重组PCR的应用 | 第17页 |
| 1.4.3 重组PCR技术要点 | 第17页 |
| 1.5 课题来源、研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 1.5.1 本论文课题来源 | 第17页 |
| 1.5.2 研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 第二章 高产D-塔格糖乳酸菌的筛选与鉴定 | 第19-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌种 | 第19页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.3 主要生化试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 所用引物 | 第19页 |
| 2.1.5 培养基及主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 菌株的富集培养与分离 | 第20页 |
| 2.2.2 高产D-塔格糖菌株的初筛 | 第20-21页 |
| 2.2.3 高产D-塔格糖菌株的复筛与L-AI粗酶酶活测定 | 第21页 |
| 2.2.4 菌株初步鉴定 | 第21页 |
| 2.2.5 改良CTAB法提取待测菌株全基因组 | 第21-22页 |
| 2.2.6 16S rDNA的扩增 | 第22页 |
| 2.2.7 16S rDNA测序及构建进化树 | 第22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-27页 |
| 2.3.1 高产D-塔格糖乳酸菌的初筛结果 | 第22-23页 |
| 2.3.2 高产D-塔格糖乳酸菌的复筛 | 第23-24页 |
| 2.3.3 高产D-塔格糖乳酸菌菌种鉴定 | 第24-27页 |
| 2.4 本章小结 | 第27-28页 |
| 第三章 L-AI基因的扩增、克隆及生物信息学分析 | 第28-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 菌种 | 第28页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第28页 |
| 3.1.3 主要生化试剂 | 第28页 |
| 3.1.4 所用引物 | 第28页 |
| 3.1.5 培养基及主要试剂的配制 | 第28-29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-31页 |
| 3.2.1 菌种活化 | 第29页 |
| 3.2.2 E. coli DH5α 感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 3.2.3 L-AI基因的扩增 | 第29页 |
| 3.2.4 PCR产物的纯化 | 第29-30页 |
| 3.2.5 L-AI基因的TA克隆与菌落PCR鉴定阳性菌 | 第30页 |
| 3.2.6 质粒PCR鉴定阳性菌 | 第30页 |
| 3.2.7 L.plantarum WU14 L-AI基因的生物信息学研究 | 第30-31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-39页 |
| 3.3.1 L-AI基因的扩增与比对 | 第31-32页 |
| 3.3.2 L-AI基因的TA克隆 | 第32-34页 |
| 3.3.3 高产D-塔格糖乳酸菌L-AI基因的核苷酸序列分析 | 第34-35页 |
| 3.3.4 高产D-塔格糖乳酸菌L-AI蛋白的二级结构预测分析 | 第35-36页 |
| 3.3.5 高产D-塔格糖乳酸菌L-AI蛋白跨膜螺旋分析和信号肽分析 | 第36-37页 |
| 3.3.6 高产D-塔格糖乳酸菌L-AI蛋白的疏水性分析 | 第37-38页 |
| 3.3.7 高产D-塔格糖乳酸菌L-AI蛋白的三级结构预测分析 | 第38-39页 |
| 3.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第四章 L. plantarum WU14的L-AI酶学性质的研究 | 第40-46页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第40页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第40页 |
| 4.1.3 培养基及主要试剂的配制 | 第40-41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-42页 |
| 4.2.1 菌种活化、发酵培养和酶反应液的制备 | 第41页 |
| 4.2.2 L. plantarum WU14的L-AI最佳转化温度的测定 | 第41页 |
| 4.2.3 L. plantarum WU14的L-AI最佳转化pH的测定 | 第41页 |
| 4.2.4 L. plantarum WU14的L-AI最佳底物浓度的测定 | 第41页 |
| 4.2.5 各种金属离子对L. plantarum WU14的L-AI转化反应的影响 | 第41-42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-45页 |
| 4.3.1 L. plantarum WU14的L-AI最佳转化温度 | 第42页 |
| 4.3.2 L. plantarum WU14的L-AI最佳转化pH | 第42-43页 |
| 4.3.3 L. plantarum WU14的L-AI最佳底物浓度 | 第43-45页 |
| 4.3.4 各种金属离子对L. plantarum WU14的L-AI转化反应的影响 | 第45页 |
| 4.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第五章 L. plantarum WU14的L-AI在L . lactis NZ9000中的食品级诱导表达 | 第46-57页 |
| 5.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 5.1.1 试验菌株及质粒 | 第46页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第46页 |
| 5.1.3 主要生化试剂 | 第46页 |
| 5.1.4 所用引物 | 第46页 |
| 5.1.5 培养基及主要试剂的配制 | 第46-47页 |
| 5.2 实验方法 | 第47-50页 |
| 5.2.1 重组PCR技术去除L-AI基因中NCOⅠ酶切位点 | 第47-49页 |
| 5.2.2 重组质粒pRNA48-L-AI的构建 | 第49-50页 |
| 5.2.3 连接产物电转化和克隆子筛选 | 第50页 |
| 5.2.4 目的基因L-AI的诱导表达及SDS-PAGE鉴定 | 第50页 |
| 5.3 结果与分析 | 第50-56页 |
| 5.3.1 L..plantarum WU14L-AI基因NCOⅠ及HindⅢ酶切位点的判定 | 第50-51页 |
| 5.3.2 重组PCR技术去除L..plantarum WU14的L-AI基因中的NCOⅠ酶切位点 | 第51-53页 |
| 5.3.3 重组质粒pRNA48-L-AI的构建及验证 | 第53-55页 |
| 5.3.4 SDS-PAGE鉴定目的基因的诱导表达 | 第55-56页 |
| 5.4 本章小结 | 第56-57页 |
| 第六章 重组菌L. lactis NZ9000/pRNA48-L-AI的L-AI遗传稳定性分析及酶学性质研究 | 第57-67页 |
| 6.1 实验材料 | 第57页 |
| 6.1.1 试验菌株 | 第57页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第57页 |
| 6.1.3 培养基及主要试剂的配制 | 第57页 |
| 6.2 试验方法 | 第57-58页 |
| 6.2.1 nisin诱导异源L-AI基因表达的最佳诱导剂量及诱导时间 | 第57页 |
| 6.2.2 L. lactis NZ9000/ pRNA48-L-AI重组菌的遗传稳定性分析 | 第57页 |
| 6.2.3 L. lactis NZ9000/ pRNA48-L-AI重组菌L-阿拉伯糖异构酶酶学性质的研究 | 第57-58页 |
| 6.3 结果与分析 | 第58-66页 |
| 6.3.1 nisin诱导L-AI基因表达的最佳诱导剂量及诱导时间 | 第58-61页 |
| 6.3.2 L. lactis NZ9000/ pRNA48-L-AI重组菌的遗传稳定性分析 | 第61-62页 |
| 6.3.3 L. lactis NZ9000/ pRNA48-L-AI重组菌L-阿拉伯糖异构酶学性质的研究 | 第62-66页 |
| 6.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 第七章 全文结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |
