| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 灰霉病的发生状况 | 第11-12页 |
| 1.2 灰葡萄孢菌的致病分子机制研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 酶类 | 第13页 |
| 1.2.2 毒素 | 第13-15页 |
| 1.2.3 G蛋白信号转导途径的调控因子 | 第15-16页 |
| 1.3 农杆菌介导的灰葡萄孢菌转化及T-DNA标签在基因克隆上的研究进展 | 第16-19页 |
| 第二章 灰葡萄孢菌突变体库的建立及筛选 | 第19-32页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 载体 | 第19页 |
| 2.1.3 主要供试试剂及仪器 | 第19-21页 |
| 2.1.4 培养基 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 农杆菌AGL-1感受态细胞制备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 农杆菌介导的灰霉转化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 转化子生物学性状分析 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-31页 |
| 2.3.1 灰葡萄孢菌转化子获得以及抗性稳定性检测 | 第25页 |
| 2.3.2 突变体的生物性状 | 第25-30页 |
| 2.3.3 致病力测定 | 第30-31页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 T-DNA插入的分子鉴定及突变体插入位点侧翼序列的克隆分析 | 第32-59页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 供试试剂及仪器 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-40页 |
| 3.2.1 转化子基因组DNA提取 | 第33-34页 |
| 3.2.2 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第34页 |
| 3.2.3 转化子的PCR分子验证 | 第34-35页 |
| 3.2.4 转化子中T-DNA插入位点侧翼序列的克隆和测序 | 第35-40页 |
| 3.2.5 T-DNA插入灰葡萄孢基因组交界区的PCR验证 | 第40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-58页 |
| 3.3.1 转化子基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| 3.3.2 转化子潮霉素基因PCR检测 | 第41-42页 |
| 3.3.3 灰葡萄孢菌基因组T-DNA旁侧序列的克隆分析 | 第42-58页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 T-DNA插入模式的Southern blotting分析、目标基因RT-PCR分析及全长cDNA克隆 | 第59-74页 |
| 4.1 材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第59页 |
| 4.1.2 供试试剂及仪器 | 第59-60页 |
| 4.2 方法 | 第60-68页 |
| 4.2.1 Southen blot分析 | 第60-63页 |
| 4.2.2 RT-PCR检测T-DNA插入的基因是否表达 | 第63-67页 |
| 4.2.3 RACE技术克隆全长cDN A | 第67-68页 |
| 4.3 结果与分析 | 第68-72页 |
| 4.3.1 Southern blotting | 第68-71页 |
| 4.3.2 转化子RT-PCR分子鉴定 | 第71-72页 |
| 4.3.3 RACE技术克隆全长cDNA结果分析 | 第72页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 目标基因全长序列克隆、表达载体构建以及突变体遗传互补 | 第74-83页 |
| 5.1 材料 | 第74页 |
| 5.1.1 菌株 | 第74页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第74页 |
| 5.2 方法 | 第74-78页 |
| 5.2.1 入门载体pENTR/D-TOPO-Bc79的构建 | 第74-77页 |
| 5.2.2 构建pCAMBIA-Bar-Bc 79载体 | 第77-78页 |
| 5.2.3 互补转化子的获得及表型分析 | 第78页 |
| 5.3 结果与分析 | 第78-82页 |
| 5.3.1 H-79转化子基因BC1G_07803.1的克隆 | 第78-79页 |
| 5.3.2 构建pENTR/D-TOPO-Bc79质粒 | 第79-80页 |
| 5.3.3 构建pCAMBIA-Bar-Bc79及pCAMBIA-Bar-Bc7质粒 | 第80页 |
| 5.3.4 互补转化子的获得及表型分析 | 第80-82页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第82-83页 |
| 第六章 结论与展望 | 第83-84页 |
| 参考文献: | 第84-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第92页 |
