| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-33页 |
| 1 稻纵卷叶螟 | 第16-18页 |
| 2 昆虫海藻糖酶和海藻糖酶基因 | 第18-20页 |
| 3 RNAi的研究进展及应用 | 第20-26页 |
| 3.1 RNAi的本质 | 第20页 |
| 3.2 RNAi的种类 | 第20-21页 |
| 3.3 RNAi的研究进展 | 第21-23页 |
| 3.4 RNAi在害虫生物防治中的应用 | 第23-26页 |
| 4 植物转基因技术及其应用 | 第26-30页 |
| 4.1 植物转基因技术 | 第26-29页 |
| 4.2 植物转基因技术的应用 | 第29-30页 |
| 5 研究目的及意义 | 第30-32页 |
| 5.1 研究目的 | 第30-31页 |
| 5.2 研究意义 | 第31-32页 |
| 6 本研究采取的技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 注射双链RNA干扰稻纵卷叶螟海藻糖酶基因的表达 | 第33-72页 |
| 1 实验材料 | 第34-38页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第34-35页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第35-36页 |
| 1.2.1 Amp溶液的配制 | 第35-36页 |
| 1.2.2 X-gal溶液的配制 | 第36页 |
| 1.2.3 IPTG溶液的配制 | 第36页 |
| 1.3 主要仪器 | 第36-37页 |
| 1.4 大肠杆菌培养基（LB） | 第37-38页 |
| 1.4.1 液体LB培养基 | 第37页 |
| 1.4.2 固体LB培养基 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-57页 |
| 2.1 靶位点设计与合成 | 第38-40页 |
| 2.2 引物设计 | 第40-41页 |
| 2.2.1 PCR以及qPCR引物设计 | 第40-41页 |
| 2.2.2 合成dsRNA的引物设计 | 第41页 |
| 2.3 总RNA提取和cDNA合成 | 第41-43页 |
| 2.3.1 总RNA提取 | 第41-42页 |
| 2.3.2 cDNA合成 | 第42-43页 |
| 2.4 dsRNA的合成 | 第43-54页 |
| 2.4.1 高浓度模板的制备 | 第43-51页 |
| 2.4.1.1 PCR扩增 | 第43-45页 |
| 2.4.1.2 目的片段的回收 | 第45-46页 |
| 2.4.1.3 目的片段的连接 | 第46页 |
| 2.4.1.4 连接产物的转化及鉴定 | 第46-49页 |
| 2.4.1.5 质粒的提取 | 第49-50页 |
| 2.4.1.6 PCR扩增高浓度模板 | 第50-51页 |
| 2.4.2 dsRNA的合成及纯化 | 第51-54页 |
| 2.4.2.1 dsRNA的制备 | 第51-53页 |
| 2.4.2.2 dsRNA的纯化 | 第53-54页 |
| 2.4.2.3 dsRNA的浓度检测 | 第54页 |
| 2.5 显微注射 | 第54页 |
| 2.6 RNAi沉默效应检测 | 第54-57页 |
| 2.6.1 取食情况观察 | 第54-55页 |
| 2.6.2 虫体表型的观察 | 第55页 |
| 2.6.3 定量PCR检测沉默效应 | 第55-56页 |
| 2.6.4 死亡率与校正死亡率的统计 | 第56-57页 |
| 2.6.5 数据统计与分析 | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-69页 |
| 3.1 dsRNA的合成 | 第57-63页 |
| 3.1.1 靶位点的克隆验证 | 第57-61页 |
| 3.1.2 高浓度模板的获得 | 第61页 |
| 3.1.3 dsRNA的合成 | 第61-63页 |
| 3.2 RNAi效应检测 | 第63-69页 |
| 3.2.1 取食情况观察 | 第63-64页 |
| 3.2.2 注射dsRNA对稻纵卷叶螟表型的影响 | 第64-66页 |
| 3.2.3 稻纵卷叶螟海藻糖酶基因的表达分析 | 第66-68页 |
| 3.2.4 死亡率与校正死亡率 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 第三章 重组RNA干扰表达载体的构建与鉴定 | 第72-95页 |
| 1 实验材料 | 第73-75页 |
| 1.1 质粒、菌株 | 第73页 |
| 1.2 酶、试剂盒及引物 | 第73-74页 |
| 1.3 主要仪器 | 第74页 |
| 1.4 培养基 | 第74-75页 |
| 1.4.1 大肠杆菌培养基（LB） | 第75页 |
| 1.4.2 农杆菌培养基（YEB） | 第75页 |
| 2 方法 | 第75-87页 |
| 2.1 靶位点合成 | 第75-78页 |
| 2.2 摇菌 | 第78页 |
| 2.3 质粒的提取 | 第78-79页 |
| 2.4 pUC57-CmTreⅡ* 和pUC57-CmTre* 以及p1301质粒的酶切回收 | 第79-80页 |
| 2.4.1 pUC57-CmTreⅡ* 和pUC57-CmTre* 以及p1301的双酶切 | 第79-80页 |
| 2.4.2 目的片段的回收 | 第80页 |
| 2.5 重组表达载体的构建 | 第80-81页 |
| 2.6 重组表达载体的筛选 | 第81页 |
| 2.7 重组表达载体的鉴定 | 第81-84页 |
| 2.7.1 菌落PCR鉴定 | 第82-83页 |
| 2.7.2 双酶切检测 | 第83-84页 |
| 2.7.3 测序鉴定 | 第84页 |
| 2.8 农杆菌转化及鉴定 | 第84-87页 |
| 2.8.1 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第84-85页 |
| 2.8.2 重组表达载体p1301-CmTreⅡ* 和p1301-CmTre* 的转化 | 第85页 |
| 2.8.3 重组表达载体转化根癌农杆菌的PCR鉴定 | 第85-87页 |
| 3 结果与分析 | 第87-93页 |
| 3.1 重组表达载体p1301-CmTreⅡ* 和p1301-CmTre* 的构建 | 第87-90页 |
| 3.1.1 质粒的酶切回收 | 第87-88页 |
| 3.1.2 目的基因片段CmTreⅡ 和CmTre与p1301的连接 | 第88-90页 |
| 3.2 重组表达载体p1301-CmTreⅡ* 和p1301-CmTre* 的鉴定 | 第90-92页 |
| 3.3 重组表达载体转化农杆菌及鉴定 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-95页 |
| 第四章 水稻的遗传转化及转基因植株的检测 | 第95-120页 |
| 1 材料 | 第96-101页 |
| 1.1 供试水稻品种 | 第96页 |
| 1.2 农杆菌菌种 | 第96页 |
| 1.3 主要试剂及配方 | 第96-98页 |
| 1.3.1 主要试剂 | 第96-97页 |
| 1.3.2 主要试剂配方 | 第97-98页 |
| 1.4 主要仪器 | 第98-99页 |
| 1.5 主要培养基 | 第99-101页 |
| 1.5.1 农杆菌培养基（YEB） | 第99页 |
| 1.5.2 转化水稻所用培养基 | 第99-101页 |
| 2 方法 | 第101-109页 |
| 2.1 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第101-103页 |
| 2.1.1 水稻成熟胚的愈伤组织的诱导及继代培养 | 第101页 |
| 2.1.2 农杆菌菌液制备 | 第101-102页 |
| 2.1.3 愈伤组织的浸染及共培养 | 第102页 |
| 2.1.4 脱菌 | 第102-103页 |
| 2.2 抗性愈伤的继代的筛选 | 第103页 |
| 2.3 转基因植株再生 | 第103-104页 |
| 2.3.1 抗性愈伤组织的分化 | 第103页 |
| 2.3.2 生根、炼苗及移栽 | 第103-104页 |
| 2.4 转基因植株的检测 | 第104-105页 |
| 2.5 转基因水稻RNA干扰效应检测 | 第105-109页 |
| 2.5.1 qPCR检测引物设计 | 第106页 |
| 2.5.2 室内接虫 | 第106页 |
| 2.5.3 取食情况观察 | 第106页 |
| 2.5.4 虫体表型观察 | 第106-107页 |
| 2.5.5 荧光定量PCR（RT-qPCR）检测室内抗虫性沉默效应检测 | 第107-108页 |
| 2.5.6 死亡率与校正死亡率 | 第108页 |
| 2.5.7 室外抗虫性卷叶率和白叶率检测 | 第108页 |
| 2.5.8 数据统计与分析 | 第108-109页 |
| 3 结果与分析 | 第109-118页 |
| 3.1 转基因植株的获得 | 第109-110页 |
| 3.2 转基因植株的RT-PCR鉴定 | 第110-112页 |
| 3.3 取食情况观察 | 第112-113页 |
| 3.4 虫体表型观察 | 第113-114页 |
| 3.5 测室内抗虫性沉默效应RT-qPCR检测 | 第114-116页 |
| 3.6 死亡率与校正死亡率 | 第116-117页 |
| 3.7 室外水稻卷叶率和白叶率检测 | 第117-118页 |
| 4 讨论 | 第118-120页 |
| 第五章 结论与展望 | 第120-122页 |
| 1 结论 | 第120-121页 |
| 2 创新点 | 第121页 |
| 3 展望 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-125页 |
| 参考文献 | 第125-137页 |
| 附录一 | 第137-139页 |
| 附录二 | 第139-140页 |
