| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第7-10页 |
| 1 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 变温动物耐低温机制 | 第10-12页 |
| 1.1.1 耐寒性 | 第10-11页 |
| 1.1.2 耐冻性 | 第11页 |
| 1.1.3 低温代谢调节 | 第11页 |
| 1.1.4 抗冻保护剂 | 第11-12页 |
| 1.1.5 代谢相关酶的调节 | 第12页 |
| 1.2 胰岛素信号通路及其相关的重要因子 | 第12-15页 |
| 1.2.1 胰岛素与胰岛素信号通路 | 第12-13页 |
| 1.2.2 PI3K与PDK1 | 第13页 |
| 1.2.3 Akt/PKB | 第13-15页 |
| 1.2.4 GSK3β 与GS | 第15页 |
| 1.3 东北林蛙 | 第15-16页 |
| 1.4 蛙类低温生理学研究 | 第16页 |
| 1.5 本实验研究目的及意义 | 第16-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-26页 |
| 2.2.1 GS、Akt2 mRNA序列及引物设计 | 第19页 |
| 2.2.2 低温胁迫 | 第19-20页 |
| 2.2.3 组织总RNA提取 | 第20页 |
| 2.2.4 cDNA合成 | 第20-22页 |
| 2.2.5 RACE法获得东北林蛙GS、Akt2基因全长cDNA序列 | 第22-25页 |
| 2.2.6 东北林蛙GS、Akt2基因全长cDNA序列的生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.2.7 mRNA表达水平的检测 | 第25-26页 |
| 2.3 本章小结 | 第26-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-37页 |
| 3.1 东北林蛙总RNA提取 | 第28页 |
| 3.2 东北林蛙GS、Akt2 cDNA基因序列全长及蛋白分析 | 第28-33页 |
| 3.2.1 东北林蛙GS、Akt2基因全长克隆及结构分析 | 第28-29页 |
| 3.2.2 东北林蛙GS、Akt2氨基酸与其他物种序列同源性比较 | 第29-30页 |
| 3.2.3 东北林蛙GS、Akt2蛋白一级结构预测 | 第30-31页 |
| 3.2.4 东北林蛙GS、Akt2磷酸位点分析 | 第31-32页 |
| 3.2.5 东北林蛙GS、Akt2编码氨基酸的信号肽预测 | 第32-33页 |
| 3.2.6 不同物种间GS、Akt2蛋白多重序列比对 | 第33页 |
| 3.3 东北林蛙GS、Akt2的基因表达分析 | 第33-36页 |
| 3.3.1 引物特异性验证 | 第33-34页 |
| 3.3.2 东北林蛙GS、Akt2的扩增溶解曲线 | 第34-35页 |
| 3.3.3 东北林蛙GS、Akt2 mRNA表达分析 | 第35-36页 |
| 3.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-40页 |
| 4.1 抗冻物质葡萄糖 | 第37页 |
| 4.2 东北林蛙GS结构与功能 | 第37页 |
| 4.3 东北林蛙GS低温胁迫表达变化 | 第37-38页 |
| 4.4 东北林蛙Akt2结构与功能 | 第38页 |
| 4.5 东北林蛙Akt2低温胁迫表达变化 | 第38-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 附录 | 第47-54页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
