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芳基乙腈类腈水解酶酶源的筛选及其在合成对甲氧基苯乙酸中的应用

摘要第9-12页
ABSTRACT第12-16页
第一章 绪论第19-45页
    1.1 生物催化第19-20页
    1.2 腈类化合物及其它的生物转化第20-21页
    1.3 腈转换酶第21-22页
    1.4 腈水解酶第22-31页
        1.4.1 腈水解酶的来源及性质第22页
        1.4.2 腈水解酶的底物特异性第22-24页
        1.4.3 酶的结构第24-28页
        1.4.4 反应机理第28页
        1.4.5 腈水解酶的应用第28-31页
    1.5 对位取代的芳基乙酸类化合物第31-35页
        1.5.1 芳基乙酸类化合物的用途第31-34页
        1.5.2 对位取代芳基乙酸类物质的合成方法第34-35页
    1.6 本论文的研究内容第35-37页
    参考文献第37-45页
第二章 产腈水解酶菌种的筛选与鉴定第45-59页
    2.1 引言第45-46页
    2.2 材料与方法第46-51页
        2.2.1 土样第46-47页
        2.2.2 化学试剂与主要仪器第47页
        2.2.3 培养基第47页
        2.2.4 菌种的初筛第47-48页
        2.2.5 菌种的复筛第48页
        2.2.6 菌种的确定第48页
        2.2.7 菌种的生理生化鉴定第48-49页
        2.2.8 16S rDNA的分子生物学鉴定第49页
        2.2.9 系统发育学分析第49页
        2.2.10 分析方法第49-51页
    2.3 结果与讨论第51-56页
        2.3.1 筛选结果第51页
        2.3.2 菌株ZJB-063的鉴定第51-56页
    2.4 本章小结第56页
    参考文献第56-59页
第三章 腈水解酶产生菌B.subtilis ZJB-063培养条件的优化第59-75页
    3.1 引言第59-60页
    3.2 材料与方法第60-61页
        3.2.1 菌种第60页
        3.2.2 培养基第60页
        3.2.3 菌体培养第60页
        3.2.4 菌体制备第60页
        3.2.5 生物量测定第60-61页
        3.2.6 静息细胞转化第61页
        3.2.7 酶活的定义第61页
        3.2.8 分析方法第61页
    3.3 结果与讨论第61-73页
        3.3.1 产酶培养基成分的优化第61-69页
        3.3.2 其它培养条件对菌体生长和产酶的影响第69-72页
        3.3.3 优化条件下的菌体生长及产酶曲线第72-73页
    3.4 本章小节第73-74页
    参考文献第74-75页
第四章 B.subtilis ZJB-063静息细胞催化对甲氧基苯乙腈生产对甲氧基苯乙酸反应条件的研究第75-93页
    4.1 引言第75-76页
    4.2 材料与方法第76-77页
        4.2.1 菌种与培养基第76页
        4.2.2 静息细胞的制备第76-77页
        4.2.3 静息细胞转化第77页
        4.2.4 酶活的定义第77页
        4.2.5 分析方法第77页
    4.3 结果与讨论第77-90页
        4.3.1 pH的影响第77-78页
        4.3.2 反应温度对酶活的影响第78-79页
        4.3.3 细胞浓度对酶活的影响第79-80页
        4.3.4 底物浓度对酶活的影响第80-81页
        4.3.5 产物浓度对酶活的影响第81-82页
        4.3.6 共溶剂对酶活的影响第82-84页
        4.3.7 金属离子对酶活的影响第84-85页
        4.3.8 转化时间对酶活的影响第85-86页
        4.3.9 反应动力学参数的确定第86-88页
        4.3.10 500ml鼓泡式反应器中对甲氧基苯乙酸的合成第88-90页
    4.4 本章小结第90页
    参考文献第90-93页
第五章 B.subtilis ZJB-063中的腈转化酶及酶解途径的探索第93-107页
    5.1 引言第93-94页
    5.2 材料与方法第94-96页
        5.2.1 化学试剂第94页
        5.2.2 菌种第94页
        5.2.3 培养基和培养条件第94页
        5.2.4 菌体培养第94页
        5.2.5 菌体制备第94-95页
        5.2.6 生物量测定第95页
        5.2.7 静息细胞转化第95页
        5.2.8 B.subtilis ZJB-063中的不同酶系及它们的底物特异性第95页
        5.2.9 分析方法第95-96页
    5.3 结果与讨论第96-103页
        5.3.1 添加各种腈类、酰胺类及羧酸类化合物对B.subtilis ZJB-063产酶和菌体生长的影响第96-97页
        5.3.2 B.subtilis ZJB-063酶解途径第97-98页
        5.3.3 B.subtilis ZJB-063胞内腈水解酶的热稳定性第98-99页
        5.3.4 B.subtilis ZJB-063腈水解酶的底物特异性第99-100页
        5.3.5 取代基效应的Hammett线性自由能方程第100-101页
        5.3.6 B.subtilis ZJB-063腈水合酶/酰胺酶的底物特异性第101-103页
    5.4 本章小结第103页
    参考文献第103-107页
第六章 固定化B.subtilis ZJB-063生产对甲氧基苯乙酸第107-124页
    6.1 引言第107-108页
    6.2 材料与方法第108-111页
        6.2.1 化学试剂第108页
        6.2.2 微生物及培养条件第108-109页
        6.2.3 固定化细胞的制备方法第109页
        6.2.4 固定化细胞生物催化制备对甲氧基苯乙酸第109-110页
        6.2.5 海藻酸钠固定化细胞制备的条件优化第110页
        6.2.6 海藻酸钠固定化细胞的转化条件研究第110-111页
        6.2.7 固定化细胞批次转化制备对甲氧基苯乙酸第111页
        6.2.8 固定化细胞机械强度测定第111页
        6.2.9 分析方法第111页
    6.3 结果与讨论第111-121页
        6.3.1 固定化方法的确定第111-117页
        6.3.2 固定化细胞转化条件的研究第117-120页
        6.3.3 固定化细胞生物合成对甲氧基苯乙酸的进程曲线第120-121页
        6.3.4 固定化细胞反应批次试验第121页
    6.4 本章小结第121-122页
    参考文献第122-124页
第七章 海藻酸钙固定化颗粒的强化第124-139页
    7.1 引言第124-125页
    7.2 材料与方法第125-128页
        7.2.1 化学试剂第125页
        7.2.2 微生物及培养条件第125-126页
        7.2.3 海藻酸钙固定化细胞的制备第126页
        7.2.4 聚乙烯亚胺(PEI)和戊二醛(GA)强化海藻酸钠固定化颗粒第126页
        7.2.5 强化参数优化第126-127页
        7.2.6 固定化强化细胞生物催化制备对甲氧基苯乙酸第127页
        7.2.7 固定化细胞批次转化制备对甲氧基苯乙酸第127页
        7.2.8 固定化细胞耐磷酸盐能力的测定第127页
        7.2.9 固定化细胞机械强度测定第127-128页
        7.2.10 底物和产物的HPLC检测法第128页
        7.2.11 固定化载体的微观结构观察第128页
    7.3 结果与讨论第128-136页
        7.3.1 聚乙烯亚胺强化后固定化细胞耐磷酸盐能力的变化第128-129页
        7.3.2 强化过程参数的影响第129-132页
        7.3.3 聚乙烯亚胺和戊二醛处理对固定化细胞酶活的影响第132-133页
        7.3.4 强化后固定化细胞的重复使用性能第133-134页
        7.3.5 聚乙烯亚胺对固定化细胞pH值的影响第134-135页
        7.3.6 固定化颗粒的微观结构观察第135-136页
    7.4 本章小结第136-137页
    参考文献第137-139页
第八章 结论与展望第139-143页
    8.1 结论第139-141页
    8.2 展望第141-143页
攻读博士学位期间发表论文情况第143-144页
致谢第144页

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