| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 第一章 绪论 | 第19-45页 |
| 1.1 生物催化 | 第19-20页 |
| 1.2 腈类化合物及其它的生物转化 | 第20-21页 |
| 1.3 腈转换酶 | 第21-22页 |
| 1.4 腈水解酶 | 第22-31页 |
| 1.4.1 腈水解酶的来源及性质 | 第22页 |
| 1.4.2 腈水解酶的底物特异性 | 第22-24页 |
| 1.4.3 酶的结构 | 第24-28页 |
| 1.4.4 反应机理 | 第28页 |
| 1.4.5 腈水解酶的应用 | 第28-31页 |
| 1.5 对位取代的芳基乙酸类化合物 | 第31-35页 |
| 1.5.1 芳基乙酸类化合物的用途 | 第31-34页 |
| 1.5.2 对位取代芳基乙酸类物质的合成方法 | 第34-35页 |
| 1.6 本论文的研究内容 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-45页 |
| 第二章 产腈水解酶菌种的筛选与鉴定 | 第45-59页 |
| 2.1 引言 | 第45-46页 |
| 2.2 材料与方法 | 第46-51页 |
| 2.2.1 土样 | 第46-47页 |
| 2.2.2 化学试剂与主要仪器 | 第47页 |
| 2.2.3 培养基 | 第47页 |
| 2.2.4 菌种的初筛 | 第47-48页 |
| 2.2.5 菌种的复筛 | 第48页 |
| 2.2.6 菌种的确定 | 第48页 |
| 2.2.7 菌种的生理生化鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.8 16S rDNA的分子生物学鉴定 | 第49页 |
| 2.2.9 系统发育学分析 | 第49页 |
| 2.2.10 分析方法 | 第49-51页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第51-56页 |
| 2.3.1 筛选结果 | 第51页 |
| 2.3.2 菌株ZJB-063的鉴定 | 第51-56页 |
| 2.4 本章小结 | 第56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 第三章 腈水解酶产生菌B.subtilis ZJB-063培养条件的优化 | 第59-75页 |
| 3.1 引言 | 第59-60页 |
| 3.2 材料与方法 | 第60-61页 |
| 3.2.1 菌种 | 第60页 |
| 3.2.2 培养基 | 第60页 |
| 3.2.3 菌体培养 | 第60页 |
| 3.2.4 菌体制备 | 第60页 |
| 3.2.5 生物量测定 | 第60-61页 |
| 3.2.6 静息细胞转化 | 第61页 |
| 3.2.7 酶活的定义 | 第61页 |
| 3.2.8 分析方法 | 第61页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第61-73页 |
| 3.3.1 产酶培养基成分的优化 | 第61-69页 |
| 3.3.2 其它培养条件对菌体生长和产酶的影响 | 第69-72页 |
| 3.3.3 优化条件下的菌体生长及产酶曲线 | 第72-73页 |
| 3.4 本章小节 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-75页 |
| 第四章 B.subtilis ZJB-063静息细胞催化对甲氧基苯乙腈生产对甲氧基苯乙酸反应条件的研究 | 第75-93页 |
| 4.1 引言 | 第75-76页 |
| 4.2 材料与方法 | 第76-77页 |
| 4.2.1 菌种与培养基 | 第76页 |
| 4.2.2 静息细胞的制备 | 第76-77页 |
| 4.2.3 静息细胞转化 | 第77页 |
| 4.2.4 酶活的定义 | 第77页 |
| 4.2.5 分析方法 | 第77页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第77-90页 |
| 4.3.1 pH的影响 | 第77-78页 |
| 4.3.2 反应温度对酶活的影响 | 第78-79页 |
| 4.3.3 细胞浓度对酶活的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.4 底物浓度对酶活的影响 | 第80-81页 |
| 4.3.5 产物浓度对酶活的影响 | 第81-82页 |
| 4.3.6 共溶剂对酶活的影响 | 第82-84页 |
| 4.3.7 金属离子对酶活的影响 | 第84-85页 |
| 4.3.8 转化时间对酶活的影响 | 第85-86页 |
| 4.3.9 反应动力学参数的确定 | 第86-88页 |
| 4.3.10 500ml鼓泡式反应器中对甲氧基苯乙酸的合成 | 第88-90页 |
| 4.4 本章小结 | 第90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 第五章 B.subtilis ZJB-063中的腈转化酶及酶解途径的探索 | 第93-107页 |
| 5.1 引言 | 第93-94页 |
| 5.2 材料与方法 | 第94-96页 |
| 5.2.1 化学试剂 | 第94页 |
| 5.2.2 菌种 | 第94页 |
| 5.2.3 培养基和培养条件 | 第94页 |
| 5.2.4 菌体培养 | 第94页 |
| 5.2.5 菌体制备 | 第94-95页 |
| 5.2.6 生物量测定 | 第95页 |
| 5.2.7 静息细胞转化 | 第95页 |
| 5.2.8 B.subtilis ZJB-063中的不同酶系及它们的底物特异性 | 第95页 |
| 5.2.9 分析方法 | 第95-96页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第96-103页 |
| 5.3.1 添加各种腈类、酰胺类及羧酸类化合物对B.subtilis ZJB-063产酶和菌体生长的影响 | 第96-97页 |
| 5.3.2 B.subtilis ZJB-063酶解途径 | 第97-98页 |
| 5.3.3 B.subtilis ZJB-063胞内腈水解酶的热稳定性 | 第98-99页 |
| 5.3.4 B.subtilis ZJB-063腈水解酶的底物特异性 | 第99-100页 |
| 5.3.5 取代基效应的Hammett线性自由能方程 | 第100-101页 |
| 5.3.6 B.subtilis ZJB-063腈水合酶/酰胺酶的底物特异性 | 第101-103页 |
| 5.4 本章小结 | 第103页 |
| 参考文献 | 第103-107页 |
| 第六章 固定化B.subtilis ZJB-063生产对甲氧基苯乙酸 | 第107-124页 |
| 6.1 引言 | 第107-108页 |
| 6.2 材料与方法 | 第108-111页 |
| 6.2.1 化学试剂 | 第108页 |
| 6.2.2 微生物及培养条件 | 第108-109页 |
| 6.2.3 固定化细胞的制备方法 | 第109页 |
| 6.2.4 固定化细胞生物催化制备对甲氧基苯乙酸 | 第109-110页 |
| 6.2.5 海藻酸钠固定化细胞制备的条件优化 | 第110页 |
| 6.2.6 海藻酸钠固定化细胞的转化条件研究 | 第110-111页 |
| 6.2.7 固定化细胞批次转化制备对甲氧基苯乙酸 | 第111页 |
| 6.2.8 固定化细胞机械强度测定 | 第111页 |
| 6.2.9 分析方法 | 第111页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第111-121页 |
| 6.3.1 固定化方法的确定 | 第111-117页 |
| 6.3.2 固定化细胞转化条件的研究 | 第117-120页 |
| 6.3.3 固定化细胞生物合成对甲氧基苯乙酸的进程曲线 | 第120-121页 |
| 6.3.4 固定化细胞反应批次试验 | 第121页 |
| 6.4 本章小结 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-124页 |
| 第七章 海藻酸钙固定化颗粒的强化 | 第124-139页 |
| 7.1 引言 | 第124-125页 |
| 7.2 材料与方法 | 第125-128页 |
| 7.2.1 化学试剂 | 第125页 |
| 7.2.2 微生物及培养条件 | 第125-126页 |
| 7.2.3 海藻酸钙固定化细胞的制备 | 第126页 |
| 7.2.4 聚乙烯亚胺(PEI)和戊二醛(GA)强化海藻酸钠固定化颗粒 | 第126页 |
| 7.2.5 强化参数优化 | 第126-127页 |
| 7.2.6 固定化强化细胞生物催化制备对甲氧基苯乙酸 | 第127页 |
| 7.2.7 固定化细胞批次转化制备对甲氧基苯乙酸 | 第127页 |
| 7.2.8 固定化细胞耐磷酸盐能力的测定 | 第127页 |
| 7.2.9 固定化细胞机械强度测定 | 第127-128页 |
| 7.2.10 底物和产物的HPLC检测法 | 第128页 |
| 7.2.11 固定化载体的微观结构观察 | 第128页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第128-136页 |
| 7.3.1 聚乙烯亚胺强化后固定化细胞耐磷酸盐能力的变化 | 第128-129页 |
| 7.3.2 强化过程参数的影响 | 第129-132页 |
| 7.3.3 聚乙烯亚胺和戊二醛处理对固定化细胞酶活的影响 | 第132-133页 |
| 7.3.4 强化后固定化细胞的重复使用性能 | 第133-134页 |
| 7.3.5 聚乙烯亚胺对固定化细胞pH值的影响 | 第134-135页 |
| 7.3.6 固定化颗粒的微观结构观察 | 第135-136页 |
| 7.4 本章小结 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-139页 |
| 第八章 结论与展望 | 第139-143页 |
| 8.1 结论 | 第139-141页 |
| 8.2 展望 | 第141-143页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
