| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-17页 |
| 1 高温诱导的防御反应 | 第12-13页 |
| 1.1 高温对大白菜的伤害 | 第12页 |
| 1.2 大白菜响应热胁迫及它的防御反应 | 第12-13页 |
| 2 转录因子的研究进展 | 第13-15页 |
| 3 cDNA文库的筛选方法 | 第15-17页 |
| 3.1 核酸杂交探针筛选法 | 第15-16页 |
| 3.2 DNA芯片技术 | 第16页 |
| 3.3 基于96孔板的PCR筛选法 | 第16-17页 |
| 第二章 大白菜推定AP2/ERF转录因子CDNA分离 | 第17-32页 |
| 1 材料与方法 | 第17-22页 |
| 1.1 实验材料 | 第17页 |
| 1.2 实验方法 | 第17-22页 |
| 1.2.1 AP2转录因子同源EST搜索、拼接以及AP2特异性引物的设计及合成 | 第17页 |
| 1.2.2 CCAP2/ERF特异性引物与文库测序引物 | 第17-18页 |
| 1.2.3 96孔板法筛选文库 | 第18-22页 |
| 2 结果与分析 | 第22-29页 |
| 2.1 目标cDNA PCR扩增的模板最大稀释倍数的确定 | 第22页 |
| 2.2 基于PCR的96孔板cDNA文库的筛选 | 第22-26页 |
| 2.2.1 第一轮PCR电泳结果 | 第22-23页 |
| 2.2.2 第二轮PCR电泳结果 | 第23-25页 |
| 2.2.3 第三轮PCR电泳结果 | 第25-26页 |
| 2.3 阳性克隆的获得 | 第26-27页 |
| 2.4 阳性克隆的测序以及同源性比较 | 第27-28页 |
| 2.5 推导氨基酸序列的分析 | 第28-29页 |
| 2.6 大白菜CCAP2/ERF1基因的结构分析及功能预测 | 第29页 |
| 3 讨论 | 第29-32页 |
| 3.1 筛选特定基因cDNA克隆的cDNA文库构建 | 第29页 |
| 3.2 关于引物的设计 | 第29-30页 |
| 3.3 关于96孔板文库的筛选 | 第30页 |
| 3.4 关于CCAP2/ERF1转录因子在大白菜中的功能 | 第30-31页 |
| 3.5 cDNA文库筛选方法 | 第31页 |
| 3.6 筛选过程中应注意的问题 | 第31页 |
| 3.7 关于大白菜AP2转录因子的cDNA阳性克隆 | 第31-32页 |
| 第三章 利用GATEWAY通用型克隆系统构建表达载体 | 第32-45页 |
| 1 材料与方法 | 第32-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第32页 |
| 1.1.1 质粒 | 第32页 |
| 1.1.2 菌株 | 第32页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第32页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第32页 |
| 1.2 方法 | 第32-40页 |
| 1.2.1 质粒制备 | 第32-33页 |
| 1.2.2 构建策略 | 第33-38页 |
| 1.2.3.表达载体对农杆菌的转化 | 第38-39页 |
| 1.2.4 农杆菌保存 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-43页 |
| 2.1 PCR扩增attB-PCR产物结果 | 第40页 |
| 2.2 入门载体pENTR207-CCAP2/ERF的PCR验证 | 第40-41页 |
| 2.3 表达载体pMDC83-CCAP2/ERF1的PCR验证 | 第41-42页 |
| 2.3.1 pMDC83和入门载体的电泳检测 | 第41页 |
| 2.3.2 LR反应结果 | 第41-42页 |
| 2.4 验证表达载体对农杆菌的转化 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 3.1 关于BP,LR反应注意事项 | 第43页 |
| 3.2 Gateway克隆技术适用于大规模基因的克隆 | 第43页 |
| 3.3 关于CCAP2/ERF1基因农杆菌介导的遗传转化结果的探讨 | 第43-45页 |
| 小结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 附录1 缩略词及英汉对照 | 第49-50页 |
| 附录2 主要仪器与主要试剂 | 第50-51页 |
| 附录3 所用试剂与缓冲液的配制 | 第51-53页 |
| 附录4 本研究中所用的DNA Marker | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
