| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 前言 | 第6-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-22页 |
| 第一章 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的研究进展 | 第11-19页 |
| 1.1 TRAIL的结构、组织分布及诱导表达 | 第11-12页 |
| 1.2 TRAIL的受体及分布 | 第12-14页 |
| 1.2.1 死亡受体(DR4与DR5) | 第12-13页 |
| 1.2.2 诱骗受体(DcR1与DcR2) | 第13页 |
| 1.2.3 可溶性受体骨保护素(OPG) | 第13-14页 |
| 1.3 TRAIL抗肿瘤作用 | 第14-15页 |
| 1.3.1 体内抗肿瘤作用 | 第14页 |
| 1.3.2 体外抗肿瘤作用 | 第14-15页 |
| 1.4 TRAIL诱导凋亡的机制 | 第15-17页 |
| 1.4.1 TRAIL通过DR4、DR5介导的凋亡信号转导通路(FADD-Caspase途径) | 第16-17页 |
| 1.4.2 NF-κ B和MAPK途径 | 第17页 |
| 1.5 TRAIL用于肿瘤治疗的前景 | 第17-18页 |
| 1.5.1 TRAIL | 第17-18页 |
| 1.5.2 抗DR单克隆抗体 | 第18页 |
| 1.6 结论和展望 | 第18-19页 |
| 第二章 蝙蝠及江豚的研究进展 | 第19-22页 |
| 2.1 蝙蝠及其相关研究进展 | 第19-20页 |
| 2.2 江豚的研究 | 第20-22页 |
| 第二部分 实验部分 | 第22-60页 |
| 第三章 蝙蝠TRAIL基因的克隆、表达及功能分析 | 第23-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 3.1.1 实验动物、质粒和宿主菌 | 第23页 |
| 3.1.2 试剂和耗材 | 第23页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第23-24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 3.2.1 蝙蝠脾脏总RNA的提取 | 第24页 |
| 3.2.2 简并引物设计 | 第24页 |
| 3.2.3 RT-PCR扩增蝙蝠TRAIL基因 | 第24-25页 |
| 3.2.4 生物信息学分析 | 第25页 |
| 3.2.5 Real-time qPCR检测TRAIL的组织分布 | 第25-26页 |
| 3.2.6 重组表达载体pET43.1a-bsTRAIL的构建 | 第26-29页 |
| 3.2.7 重组bsTRAIL蛋白的体外表达 | 第29页 |
| 3.2.8 表达产物的纯化及western blot鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.9 重组可溶蛋白生物活性测定 | 第30-32页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第32-38页 |
| 3.3.1 蝙蝠TRAIL (bTRAIL)序列 | 第32页 |
| 3.3.2 bTRAIL氨基酸序列的生物信息学分析 | 第32-35页 |
| 3.3.3 bTRAIL的组织特异性分布 | 第35-36页 |
| 3.3.4 pET43.1a-bsTRAIL蛋白的表达和纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.5 MTT法检测重组bsTRAIL | 第37页 |
| 3.3.6 Jurkat和HeLa细胞的形态观察和台盼蓝染色 | 第37-38页 |
| 3.3.7 流式细胞仪检测细胞的凋亡 | 第38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 江豚TRAIL的克隆、表达及生物活性鉴定 | 第40-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 实验动物,细胞和宿主菌 | 第40页 |
| 4.1.2 试剂和耗材 | 第40页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第40-41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-49页 |
| 4.2.1 江豚外周血血液总RNA的提取 | 第41页 |
| 4.2.2 江豚TRAIL (fTRAIL)基因的克隆 | 第41-43页 |
| 4.2.3 生物信息学分析 | 第43页 |
| 4.2.4 融合表达载体pET43.1a-fsTRAIL的构建 | 第43-46页 |
| 4.2.5 重组fsTRAIL的表达、鉴定及纯化 | 第46-48页 |
| 4.2.6 重组可溶蛋白生物活性测定 | 第48-49页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第49-57页 |
| 4.3.1 江豚全长的fTRAIL cDNA的鉴定和分析 | 第49-50页 |
| 4.3.2 江豚TRAIL(fTRAIL)氨基酸序列比对 | 第50-51页 |
| 4.3.3 fTRAIL疏水性分析 | 第51-52页 |
| 4.3.4 蛋白质空间结构 | 第52-53页 |
| 4.3.5 系统进化树 | 第53-54页 |
| 4.3.6 fTRAIL蛋白的理化性质分析 | 第54-55页 |
| 4.3.7 重组蛋白的表达,纯化和鉴定 | 第55页 |
| 4.3.8 MTT法检测重组fsTRAIL | 第55-56页 |
| 4.3.9 Jurkat和HeLa细胞的形态观察和台盼蓝染色 | 第56-57页 |
| 4.3.10 流式细胞仪检测细胞的凋亡 | 第57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-60页 |
| 全文总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
