| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-20页 |
| ·EGFR 的信号通路及单克隆抗体的作用 | 第15-19页 |
| ·EGFR 蛋白及其信号通路 | 第15-16页 |
| ·EGFR 的靶点药物和它们的作用机理 | 第16-18页 |
| ·全长单克隆抗体Cetuximab | 第18-19页 |
| ·本课题的创意及构想 | 第19-20页 |
| 第二章 通过修改 Cetuximab 抗体密码子和改进腺病毒载体来提高其表达量 | 第20-58页 |
| ·前言 | 第20页 |
| ·材料 | 第20-27页 |
| ·主要质粒和载体 | 第20-21页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·细胞株 | 第22-23页 |
| ·引物合成 | 第23页 |
| ·基因的合成 | 第23-27页 |
| ·载体的构建示意图 | 第27-29页 |
| ·pDC-339-C225 的构建示意图 | 第27-28页 |
| ·pDC-339-NC225 的构建示意图 | 第28页 |
| ·pDC311-UDITR-NC225 的构建示意图 | 第28-29页 |
| ·构建步骤及方法 | 第29-43页 |
| ·腺病毒穿梭载体pDC339-C225 的构建 | 第29-35页 |
| ·腺病毒穿梭载体pDC339-NC225 的构建 | 第35-40页 |
| ·腺病毒穿梭载体pDC311-UDITR-NC225 的构建 | 第40-43页 |
| ·腺病毒Ad5-C225、Ad5-NC225、Ad5-UDITR-NC225 的重组及扩增 | 第43-47页 |
| ·293 细胞培养 | 第43页 |
| ·腺病毒重组及其鉴定 | 第43-44页 |
| ·病毒的扩增 | 第44-45页 |
| ·用qRT-PCR(实时荧光定量PCR)的方法测重组腺病毒滴度 | 第45页 |
| ·HPLC 纯化病毒 | 第45-46页 |
| ·应用5096组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-55页 |
| ·腺病毒穿梭载体pDC339-C225 的构建 | 第47-50页 |
| ·腺病毒穿梭载体pDC339-NC225 的构建 | 第50-52页 |
| ·腺病毒穿梭载体pDC311-UDITR-NC225 的构建 | 第52-53页 |
| ·腺病毒Ad5-C225、Ad5-NC225、Ad5-UDITR-NC225 的野毒PCR 法鉴定和全长抗体基因的PCR 法鉴定 | 第53-54页 |
| ·三个病毒滴度的测定 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 第三章 表达全长抗体Cetuximab 的腺病毒载体的体外实验 | 第58-70页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·材料 | 第58-62页 |
| ·实验细胞株 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| ·主要仪器设备列表 | 第59-60页 |
| ·主要溶液的配制 | 第60-62页 |
| ·方法 | 第62-66页 |
| ·三个重组腺病毒载体在细胞中Cetuximab 抗体的表达量测定 | 第62-63页 |
| ·Western Blot 方法检测抗体Cetuximab 的表达 | 第63-65页 |
| ·病毒表达的Cetuximab 抗体特异性测定：间接免疫荧光实验(IFA) | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-68页 |
| ·ELISA 检测 | 第66页 |
| ·Western Blot 检测 | 第66页 |
| ·重组病毒表达的Cetuximab 抗体特异性测定 | 第66-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
