| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第10-13页 |
| 第一章 癌症研究现状和癌症靶向基因病毒治疗的概述 | 第13-20页 |
| ·癌症治疗的研究现状 | 第13-15页 |
| ·溶瘤腺病毒的发展与研究概述 | 第15-17页 |
| ·腺病毒的结构特点及腺病毒载体的应用优势和分类 | 第15-16页 |
| ·肿瘤特异性增殖腺病毒的构建策略 | 第16页 |
| ·E1 区改造的溶瘤腺病毒的发展过程介绍 | 第16-17页 |
| ·Survivin 与肿瘤靶向 | 第17-18页 |
| ·肿瘤治疗基因mda-7/IL-24 在肿瘤治疗中的应用简介 | 第18-20页 |
| 第二章 Survivin 启动子调控 E1A 和E1B 双调控溶瘤腺病毒表达IL-24 蛋白对肿瘤的治疗研究 | 第20-54页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·腺病毒 | 第20页 |
| ·工具酶及生化试剂 | 第20-21页 |
| ·细胞株 | 第21-22页 |
| ·抗体 | 第22页 |
| ·实验主要仪器 | 第22-23页 |
| ·合成引物序列 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-40页 |
| ·重组质粒pAd·sp·E1A_((△24))·E18_((△55))·IL-24 的构建 | 第23-32页 |
| ·质粒pXC2·sp·E1A_((△24))的构建 | 第27-29页 |
| ·质粒pAd·sp·E1A_((△24))·E18_((△55))的构建 | 第29页 |
| ·质粒p Ad·sp·E1A_((△24))·E18_((△55))·IL-24 的构建 | 第29-32页 |
| ·重组腺病毒的包装、纯化、扩增和滴定 | 第32-36页 |
| ·重组腺病毒的包装 | 第32页 |
| ·病毒Ad·sp·E1A_((△24))·E18_((△55))·EGFP和Ad·sp·E1A_((△24))·E18_((△55))·IL-24的纯化 | 第32-33页 |
| ·重组病毒鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组病毒的大量制备与CsCl 梯度离心纯化病毒 | 第34页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第34-36页 |
| ·溶瘤腺病毒Ad·sp·E1A_((△24))·E18_((△55))·IL-24 体外抗瘤效果评价 | 第36-39页 |
| ·MTT 法检测肿瘤细胞存活率 | 第36页 |
| ·结晶紫实验检测Ad·sp·E1A_((△24))·E18_((△55))·IL-24 对肿瘤细胞的毒性 | 第36页 |
| ·Hoechst 33342 染色观察细胞凋亡 | 第36-37页 |
| ·Western Blot 实验 | 第37-39页 |
| ·溶瘤腺病毒Ad·sp·E1A_((△24))·E18_((△55))·IL-24 体内抗瘤效果评价 | 第39-40页 |
| ·肺癌H460 荷瘤裸鼠模型的建立及瘤内注射 | 第39-40页 |
| ·统计学分析 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-52页 |
| ·重组质粒的的鉴定 | 第40-42页 |
| ·质粒pXC2·sp·E1A_((△24))的鉴定 | 第40-41页 |
| ·质粒 pAd·sp·E1A_((△24))·E1B_((△55))的鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒 pAd·sp·E1A_((△24))·E1B_((△55))·IL-24 的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组溶瘤腺病毒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·survivin 启动子高效驱动重组病毒早期基因 E1A 在肿瘤细胞中的表达 | 第43-44页 |
| ·溶瘤腺病毒Ad·sp·E1A_((△24))·E1B_((△55))·IL-24可在肿瘤细胞中高效表达IL-24蛋白 | 第44-45页 |
| ·MTT 法检测溶瘤病毒 Ad·sp·E1A_((△24))·E1B_((△55))·IL-24 对肿瘤细胞的体外杀伤效果 | 第45-48页 |
| ·结晶紫实验分析溶瘤病毒 Ad·sp·E1A_((△24))·E1B_((△55))·IL-24 对肿瘤细胞的毒性 | 第48-49页 |
| ·凋亡细胞的染色实验 | 第49-50页 |
| ·Western blot 检测凋亡通路中关键蛋白的表达 | 第50-51页 |
| ·Ad·sp·E1A_((△24))·E1B_((△55))·IL-24 能有效抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长 | 第51-52页 |
| ·讨论与展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 硕士研究生期间的研究成果 | 第59页 |
