| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 缩略词表 | 第18-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-40页 |
| 1 气单胞菌 | 第20-29页 |
| 1.1 引言 | 第20-23页 |
| 1.2 气单胞菌的主要毒力因子 | 第23-29页 |
| 1.2.1 表面多糖 | 第23-26页 |
| 1.2.2 外毒素和其他包外酶 | 第26-28页 |
| 1.2.3 分泌系统 | 第28页 |
| 1.2.4 粘附素 | 第28-29页 |
| 1.2.5 运动性和鞭毛 | 第29页 |
| 2 益生菌 | 第29-38页 |
| 2.1 益生菌的定义 | 第30-31页 |
| 2.2 益生菌的筛选 | 第31页 |
| 2.3 水产养殖中益生菌的种类 | 第31-33页 |
| 2.4 益生菌在水产养殖中的使用方式 | 第33-34页 |
| 2.4.1 水体或者饲料添加 | 第33页 |
| 2.4.2 单一或混合使用 | 第33页 |
| 2.4.3 使用剂量 | 第33-34页 |
| 2.5 益生菌的作用方式 | 第34-37页 |
| 2.5.1 竞争排斥 | 第35页 |
| 2.5.2 拮抗能力 | 第35页 |
| 2.5.3 增强免疫反应 | 第35页 |
| 2.5.4 提高水质 | 第35-36页 |
| 2.5.5 营养和消化酶的贡献 | 第36-37页 |
| 2.6 益生菌表面结构与益生机制 | 第37-38页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第38-40页 |
| 第二章 气单胞菌感染机制的研究 | 第40-90页 |
| 1 引言 | 第40-41页 |
| 2 实验材料 | 第41-44页 |
| 2.1 实验动物 | 第41页 |
| 2.2 实验菌株 | 第41-42页 |
| 2.3 实验试剂 | 第42-43页 |
| 2.4 常用溶液和培养基 | 第43-44页 |
| 2.5 引物合成和核算序列测序 | 第44页 |
| 2.6 主要仪器和设备 | 第44页 |
| 3 实验方法 | 第44-64页 |
| 3.1 无菌斑马鱼的培养 | 第44-45页 |
| 3.1.1 无菌斑马鱼的制备方法 | 第44-45页 |
| 3.1.2 无菌斑马鱼的无菌检测 | 第45页 |
| 3.2 2009-2014年中国华南地区鱼类出血病的普查 | 第45-46页 |
| 3.2.1 流行病学数据分析 | 第45页 |
| 3.2.2 病原菌系统发育树分析 | 第45-46页 |
| 3.3 气单胞菌毒力的评价 | 第46页 |
| 3.3.1 浸浴攻毒模型对气单胞菌毒力大小的评价 | 第46页 |
| 3.3.2 腹腔注射攻毒模型对气单胞菌毒力大小的评价 | 第46页 |
| 3.4 气单胞菌毒力大小与生物膜形成能力、溶血活性及蛋白酶活性的关系 | 第46-47页 |
| 3.4.1 生物膜形成能力 | 第46-47页 |
| 3.4.2 溶血能力的测定 | 第47页 |
| 3.4.3 蛋白酶活性的测定 | 第47页 |
| 3.5 维氏气单胞菌Hm091转座子突变文库的构建及无毒突变株的筛选 | 第47-51页 |
| 3.5.1 转座子突变文库的构建 | 第47-51页 |
| 3.5.2 转座子突变文库----无毒突变株的筛选 | 第51页 |
| 3.6 基因敲除实验 | 第51-58页 |
| 3.6.1 敲除质粒pRE112/目的基因的构建 | 第51-58页 |
| 3.6.2 A.veronii Hm091基因敲除株的攻毒验证 | 第58页 |
| 3.6.3 A.hydrophila NJ-1基因敲除株的注射攻毒验证 | 第58页 |
| 3.7 维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌联合感染实验 | 第58-59页 |
| 3.8 组织切片观察气单胞菌感染后对斑马鱼肠道损伤的影响 | 第59页 |
| 3.9 气单胞菌在斑马鱼中的定位 | 第59-60页 |
| 3.10 2016年中国华南地区气单胞菌联合感染造成鱼类出血病爆发的调查 | 第60页 |
| 3.11 菌群对维氏气单胞菌感染斑马鱼的影响 | 第60-64页 |
| 3.11.1 喹乙醇添加处理 | 第60页 |
| 3.11.2 菌群转接及维氏气单胞菌攻毒 | 第60-61页 |
| 3.11.3 肠道菌群中气单胞菌的数量分析 | 第61页 |
| 3.11.4 肠道菌群结构分析 | 第61-64页 |
| 3.12 气单胞菌属基于气溶素(aerolysin)的系统进化树分析 | 第64页 |
| 3.13 气单胞菌属及弧菌属基于RtxA的系统进化树分析 | 第64页 |
| 3.14 数据分析 | 第64页 |
| 4 结果 | 第64-87页 |
| 4.1 2009-2014年中国华南地区鱼类出血病爆发情况 | 第64-68页 |
| 4.1.1 病原菌的时间分布情况 | 第64-66页 |
| 4.1.2 病原菌在鱼类中的分布情况 | 第66页 |
| 4.1.3 病原菌的地域分布情况 | 第66-68页 |
| 4.2 维氏气单胞菌及嗜水气单胞菌毒力大小的评价及毒力特性 | 第68-72页 |
| 4.2.1 维氏气单胞菌及嗜水气单胞菌在无菌斑马鱼浸浴感染模型中的毒力大小 | 第68-70页 |
| 4.2.2 毒力大小与生物膜形成能力、溶血活性以及蛋白酶活性的关系 | 第70-71页 |
| 4.2.3 维氏气单胞菌及嗜水气单胞菌在腹腔注射攻毒模型中的毒力大小 | 第71-72页 |
| 4.3 维氏气单胞菌Hm091转座子突变文库筛选结果 | 第72-73页 |
| 4.4 维氏气单胞菌毒力因子的鉴定 | 第73-74页 |
| 4.5 嗜水气单胞菌毒力因子的鉴定 | 第74-75页 |
| 4.6 维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌的联合感染作用 | 第75-76页 |
| 4.7 维氏气单胞菌诱导斑马鱼肠道损伤 | 第76-78页 |
| 4.8 维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌感染后在斑马鱼中的定位 | 第78-79页 |
| 4.9 流行病调查进一步确认气单胞菌混合感染是鱼类出血病爆发的主要原因 | 第79-80页 |
| 4.10 气溶素在气单胞菌各个种之间的系统进化发育关系 | 第80-81页 |
| 4.11 RtxA在气单胞菌属及弧菌属的分布情况 | 第81-82页 |
| 4.12 肠道菌群对维氏气单胞菌感染的影响 | 第82-87页 |
| 4.12.1 喹乙醇处理对罗非鱼肠道菌群的影响 | 第82-86页 |
| 4.12.2 肠道菌群中气单胞菌属对维氏气单胞菌感染的影响 | 第86-87页 |
| 5 讨论 | 第87-89页 |
| 6 小结 | 第89-90页 |
| 第三章 益生菌对斑马鱼抗病性及促生长作用的研究 | 第90-113页 |
| 1 引言 | 第90-91页 |
| 2 实验材料 | 第91-93页 |
| 2.1 实验动物 | 第91-92页 |
| 2.2 实验菌株 | 第92页 |
| 2.3 实验试剂 | 第92页 |
| 2.4 常用溶液和培养基 | 第92-93页 |
| 2.5 主要仪器和设备 | 第93页 |
| 3 实验设计 | 第93-98页 |
| 3.1 益生菌抗病性能的评价 | 第93页 |
| 3.1.1 乳酸菌的培养与准备 | 第93页 |
| 3.1.2 斑马鱼的预处理及攻毒 | 第93页 |
| 3.2 益生菌促生长性能的评价 | 第93-95页 |
| 3.2.1 乳酸菌的培养与准备 | 第94页 |
| 3.2.2 斑马鱼处理 | 第94-95页 |
| 3.3 乳酸菌促生长机制的探究 | 第95-98页 |
| 3.3.1 乳酸菌的培养与准备 | 第95页 |
| 3.3.2 乳酸菌添加处理斑马鱼 | 第95页 |
| 3.3.3 样品采集 | 第95-96页 |
| 3.3.4 总RNA的提取 | 第96页 |
| 3.3.5 总RNA样品检测 | 第96页 |
| 3.3.6 文库构建 | 第96-97页 |
| 3.3.7 上机测序 | 第97页 |
| 3.3.8 数据分析 | 第97-98页 |
| 3.4 数据分析 | 第98页 |
| 4 结果 | 第98-111页 |
| 4.1 不同乳酸菌对斑马鱼抵抗气单胞菌感染的影响 | 第98页 |
| 4.2 乳酸菌促生长性能预试验结果 | 第98-100页 |
| 4.2.1 乳酸菌添加后在水体中的变化趋势 | 第99页 |
| 4.2.2 促生长乳酸菌菌株的筛选结果 | 第99-100页 |
| 4.3 乳酸菌对斑马鱼生长发育的影响 | 第100-101页 |
| 4.4 乳酸菌处理后对斑马鱼基因转录表达的影响 | 第101-111页 |
| 4.4.1 测序质量评估 | 第101-103页 |
| 4.4.2 差异表达基因筛选 | 第103页 |
| 4.4.3 显著差异表达基因GO功能分析 | 第103-107页 |
| 4.4.4 差异表达基因KGGE通路富集 | 第107-111页 |
| 5 讨论 | 第111-112页 |
| 6 小结 | 第112-113页 |
| 第四章 干酪乳杆菌BL23提高斑马鱼抵抗维氏气单胞菌感染的分子机制研究 | 第113-138页 |
| 1 引言 | 第113-114页 |
| 2 实验材料 | 第114-116页 |
| 2.1 实验动物 | 第114页 |
| 2.2 实验菌株及细胞 | 第114页 |
| 2.3 实验试剂 | 第114-115页 |
| 2.4 常用溶液和培养基 | 第115-116页 |
| 2.5 引物合成和核算序列测序 | 第116页 |
| 2.6 主要仪器和设备 | 第116页 |
| 3 实验方法 | 第116-125页 |
| 3.1 动物实验 | 第116-123页 |
| 3.1.1 乳酸菌BL23的浓度对斑马鱼抵抗维氏气单胞菌的影响 | 第116-119页 |
| 3.1.2 菌群转接实验 | 第119-120页 |
| 3.1.3 乳酸菌BL23死菌对斑马鱼抵抗维氏气单胞菌的影响 | 第120-121页 |
| 3.1.4 乳酸菌BL23多糖蛋白复合物的提取及分析 | 第121-123页 |
| 3.1.5 乳酸菌BL23多糖蛋白复合物对斑马鱼抵抗维氏气单胞菌感染的影响 | 第123页 |
| 3.2 细胞实验 | 第123-125页 |
| 3.2.1 斑马鱼肝脏细胞(ZFL)系的培养 | 第123页 |
| 3.2.2 ZFL细胞的处理 | 第123-124页 |
| 3.2.3 ZFL细胞样品的收集、处理以及基因表达分析 | 第124-125页 |
| 3.3 数据分析 | 第125页 |
| 4 结果 | 第125-134页 |
| 4.1 乳酸菌浓度对斑马鱼抵抗维氏气单胞菌感染的影响 | 第125-126页 |
| 4.2 BL23提高斑马鱼抵抗维氏气单胞菌感染的作用方式 | 第126-129页 |
| 4.2.1 BL23对斑马鱼肠道菌群的影响 | 第126-128页 |
| 4.2.2 BL23细菌本身对斑马鱼抵抗维氏气单胞菌感染的影响 | 第128页 |
| 4.2.3 BL23对斑马鱼介导的免疫调节作用 | 第128-129页 |
| 4.3 BL23的细胞活性对斑马鱼抵抗维氏气单胞菌感染的影响 | 第129-131页 |
| 4.4 BL23细胞提取物EPSP的结构分析 | 第131-132页 |
| 4.5 EPSP提高斑马鱼对维氏气单胞菌感染的抵抗力 | 第132-133页 |
| 4.6 EPSP对斑马鱼肝脏细胞免疫反应的影响 | 第133-134页 |
| 5 讨论 | 第134-137页 |
| 6 小结 | 第137-138页 |
| 第五章 结论、创新点和研究展望 | 第138-139页 |
| 1 结论 | 第138页 |
| 2 创新点 | 第138页 |
| 3 研究展望 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-159页 |
| 个人简介 | 第159-160页 |
| 致谢 | 第160-161页 |
