| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 前言 | 第13-25页 |
| 1 日本对虾crustin-like基因全长序列的克隆 | 第25-38页 |
| 1.1 试验材料与仪器 | 第25-27页 |
| 1.1.1 试验动物与毒种 | 第25页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第25-26页 |
| 1.1.3 试验仪器与设备 | 第26-27页 |
| 1.2 试验方法 | 第27-33页 |
| 1.2.1 样品采集 | 第27页 |
| 1.2.2 血淋巴总RNA提取 | 第27页 |
| 1.2.3 cDNA末端快速扩增（RACE） | 第27-31页 |
| 1.2.3.1 3' RACE | 第27-29页 |
| 1.2.3.2 5' RACE | 第29-31页 |
| 1.2.4 PCR扩增全长 | 第31页 |
| 1.2.5 克隆与测序 | 第31-33页 |
| 1.2.5.1 琼脂糖切胶回收 | 第32页 |
| 1.2.5.2 载体连接与转化 | 第32页 |
| 1.2.5.3 菌液PCR与测序 | 第32-33页 |
| 1.2.5.4 测序结果分析 | 第33页 |
| 1.3 试验结果 | 第33-37页 |
| 1.3.1 全长序列拼接与分析 | 第33-35页 |
| 1.3.2 保守性分析 | 第35页 |
| 1.3.3 进化树构建 | 第35-37页 |
| 1.4 讨论 | 第37页 |
| 1.5 小结 | 第37-38页 |
| 2 日本对虾crustin-like基因敲低及免疫功能探究 | 第38-51页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第38页 |
| 2.1.1 试验动物与毒种 | 第38页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第38页 |
| 2.1.3 试验仪器与设备 | 第38页 |
| 2.2 试验方法 | 第38-45页 |
| 2.2.1 组织表达量检测 | 第38-40页 |
| 2.2.1.1 对虾组织总RNA提取 | 第38-39页 |
| 2.2.1.2 cDNA合成 | 第39页 |
| 2.2.1.3 实时荧光定量检测 | 第39-40页 |
| 2.2.1.4 结果分析 | 第40页 |
| 2.2.2 dsRNA质粒构建 | 第40-41页 |
| 2.2.2.1 HT115感受态细胞的制备 | 第40页 |
| 2.2.2.2 引物设计 | 第40-41页 |
| 2.2.2.3 融合表达载体 | 第41页 |
| 2.2.3 CRU-dsRNA的诱导表达 | 第41-42页 |
| 2.2.3.1 dsRNA提取 | 第41页 |
| 2.2.3.2 dsRNA退火 | 第41-42页 |
| 2.2.3.3 dsRNA纯化 | 第42页 |
| 2.2.3.4 dsRNA纯度检测 | 第42页 |
| 2.2.4 CRU-dsRNA干扰效果检测 | 第42页 |
| 2.2.4.1 RNA提取 | 第42页 |
| 2.2.4.2 cDNA合成 | 第42页 |
| 2.2.4.3 实时荧光定量检测 | 第42页 |
| 2.2.5 免疫基因检测 | 第42-43页 |
| 2.2.5.1 引物设计 | 第42-43页 |
| 2.2.5.2 dsRNA注射处理 | 第43页 |
| 2.2.5.3 RNA提取 | 第43页 |
| 2.2.5.4 cDNA合成 | 第43页 |
| 2.2.5.5 实时荧光定量检测 | 第43页 |
| 2.2.6 免疫活性检测 | 第43页 |
| 2.2.6.1 dsRNA注射处理 | 第43页 |
| 2.2.6.2 血细胞总数（THC）检测 | 第43页 |
| 2.2.6.3 PO活性 | 第43页 |
| 2.2.6.4 SOD活性 | 第43页 |
| 2.2.7 数据统计 | 第43-45页 |
| 2.3 试验结果 | 第45-49页 |
| 2.3.1 crustin-like组织表达差异性分析 | 第45页 |
| 2.3.2 dsRNA体外试验干扰crustin-like表达 | 第45-47页 |
| 2.3.2.1 CRU-dsRNA质粒构建 | 第45-46页 |
| 2.3.2.2 dsRNA纯度检测 | 第46页 |
| 2.3.2.3 CRU-dsRNA干扰效果检测 | 第46-47页 |
| 2.3.2.4 干扰时效检测 | 第47页 |
| 2.3.3 重要免疫基因表达量检测 | 第47-48页 |
| 2.3.4 免疫活性检测 | 第48-49页 |
| 2.3.4.1 血细胞总数（THC）检测 | 第48页 |
| 2.3.4.2 酚氧化酶（PO）活性 | 第48-49页 |
| 2.3.4.3 超氧化物歧化酶（SOD）活性 | 第49页 |
| 2.4 讨论 | 第49-50页 |
| 2.5 小结 | 第50-51页 |
| 3 日本对虾crustin-like基因抗菌活性的探究 | 第51-61页 |
| 3.1 试验材料与仪器 | 第51页 |
| 3.1.1 试验动物与毒种 | 第51页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第51页 |
| 3.1.3 试验仪器与设备 | 第51页 |
| 3.2 试验方法 | 第51-54页 |
| 3.2.1 病原诱导表达变化分析 | 第51页 |
| 3.2.1.1 对虾攻毒处理 | 第51页 |
| 3.2.1.2 RNA提取 | 第51页 |
| 3.2.1.3 cDNA合成 | 第51页 |
| 3.2.1.4 实时荧光定量检测 | 第51页 |
| 3.2.1.5 结果分析 | 第51页 |
| 3.2.2 Kaplan–Meier生存分析试验 | 第51-52页 |
| 3.2.2.1 dsRNA及攻毒处理 | 第51-52页 |
| 3.2.2.2 分组设计 | 第52页 |
| 3.2.2.3 数据统计 | 第52页 |
| 3.2.3 吞噬试验 | 第52-53页 |
| 3.2.3.1 FITC标记V. alginolyticus | 第52页 |
| 3.2.3.2 日本对虾血淋巴细胞培养 | 第52-53页 |
| 3.2.3.3 吞噬与制片 | 第53页 |
| 3.2.3.4 流式细胞术计算吞噬百分率 | 第53页 |
| 3.2.4 THC检测 | 第53-54页 |
| 3.2.5 血细胞凋亡 | 第54页 |
| 3.2.6 数据统计 | 第54页 |
| 3.3 试验结果 | 第54-59页 |
| 3.3.1 病原诱导crustin-like表达变化分析 | 第54-55页 |
| 3.3.2 Kaplan–Meier生存分析试验 | 第55-56页 |
| 3.3.3 Crustin-like对细胞吞噬作用的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.3.1 Crustin-like对细胞吞噬的影响 | 第56页 |
| 3.3.3.2 Crustin-like对细胞骨架蛋白的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.4 THC检测 | 第57-58页 |
| 3.3.5 Crustin-like对细胞凋亡的影响 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-60页 |
| 3.5 小结 | 第60-61页 |
| 4 日本对虾crustin-like基因促进病毒复制的研究 | 第61-77页 |
| 4.1 试验材料与仪器 | 第61页 |
| 4.1.1 试验动物与毒种 | 第61页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第61页 |
| 4.1.3 试验仪器与设备 | 第61页 |
| 4.2 试验方法 | 第61-68页 |
| 4.2.1 病原诱导crustin-like表达变化分析 | 第61页 |
| 4.2.1.1 实验材料处理 | 第61页 |
| 4.2.1.2 RNA提取 | 第61页 |
| 4.2.1.3 cDNA合成 | 第61页 |
| 4.2.1.4 实时荧光定量检测 | 第61页 |
| 4.2.1.5 结果分析 | 第61页 |
| 4.2.2 WSSV提取与纯化 | 第61-62页 |
| 4.2.3 病毒拷贝数检测 | 第62-64页 |
| 4.2.3.1 标准品制备 | 第62-63页 |
| 4.2.3.2 dsRNA注射处理 | 第63页 |
| 4.2.3.3 基因组DNA提取 | 第63页 |
| 4.2.3.4 检测体系与程序 | 第63-64页 |
| 4.2.3.5 数据分析 | 第64页 |
| 4.2.4 THC检测 | 第64页 |
| 4.2.5 Kaplan–Meier生存分析试验 | 第64-65页 |
| 4.2.5.1 分组设计 | 第64页 |
| 4.2.5.2 数据统计 | 第64-65页 |
| 4.2.6 细胞吞噬试验 | 第65-66页 |
| 4.2.6.1 WSSV病毒灭活 | 第65页 |
| 4.2.6.2 FITC标记病毒 | 第65页 |
| 4.2.6.3 日本对虾血淋巴细胞培养 | 第65页 |
| 4.2.6.4 吞噬与制片 | 第65页 |
| 4.2.6.5 流式细胞术计算吞噬百分率 | 第65-66页 |
| 4.2.7 血细胞凋亡 | 第66页 |
| 4.2.8 WSSV早期基因检测 | 第66-67页 |
| 4.2.8.1 dsRNA注射处理 | 第66页 |
| 4.2.8.2 RNA提取 | 第66页 |
| 4.2.8.3 第一链cDNA合成 | 第66-67页 |
| 4.2.8.4 半定量PCR | 第67页 |
| 4.2.9 数据统计 | 第67-68页 |
| 4.3 试验结果 | 第68-75页 |
| 4.3.1 病原诱导表达变化分析 | 第68页 |
| 4.3.2 THC检测 | 第68-69页 |
| 4.3.3 WSSV提取 | 第69-70页 |
| 4.3.4 WSSV拷贝数检测 | 第70页 |
| 4.3.5 Kaplan–Meier生存分析试验 | 第70-71页 |
| 4.3.6 Crustin-like对细胞吞噬作用的影响 | 第71-73页 |
| 4.3.6.1 Crustin-like对细胞吞噬的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.6.2 Crustin-like对细胞骨架蛋白的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.7 Crustin-like对细胞凋亡的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.8 WSSV早期基因的检测 | 第74-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-76页 |
| 4.5 小结 | 第76-77页 |
| 5. 全文总结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 附录 | 第87-88页 |
| 个人简介 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
