| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 棉花生产的概况及意义 | 第12-13页 |
| 1.2 黄萎病对棉花的危害 | 第13页 |
| 1.3 棉花在抗病方面的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.3.1 传统防控方法 | 第13-14页 |
| 1.3.2 棉花黄萎病抗性材料的筛选方法 | 第14-15页 |
| 1.3.3 病程相关（PR）基因 | 第15-16页 |
| 1.3.4 BOP基因的研究进展 | 第16页 |
| 1.3.5 NPR1基因的研究 | 第16-17页 |
| 1.3.6 TGA转录因子的研究 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第20-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第20页 |
| 2.1.3 酶与试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 培养基 | 第20-22页 |
| 2.1.5 VIGS重悬液的配制 | 第22页 |
| 2.1.6 常用溶液、抗生素与激素的配制 | 第22-24页 |
| 2.1.7 蛋白电泳胶及缓冲液的配制 | 第24-25页 |
| 2.1.8 蛋白纯化相关溶液 | 第25-26页 |
| 2.1.8.1 HIS标签蛋白纯化相关溶液 | 第25-26页 |
| 2.1.8.2 GST标签蛋白纯化相关溶液 | 第26页 |
| 2.1.9 引物设计 | 第26-27页 |
| 2.1.10 仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-42页 |
| 2.2.1 GhBOP2基因的克隆 | 第28-30页 |
| 2.2.1.1 棉花幼苗的培养 | 第28页 |
| 2.2.1.2 棉花总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.1.3 棉花cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.1.4 棉花GhBOP2基因的扩增 | 第30页 |
| 2.2.2 GhBOP2蛋白的同源性分析 | 第30页 |
| 2.2.3 GhBOP2的进化树分析 | 第30-31页 |
| 2.2.4 棉花GhBOP1/2 基因抗病功能分析 | 第31-42页 |
| 2.2.4.1 GhBOP1、GhBOP2、GhBOP1-2 VIGS的载体构建 | 第31-36页 |
| 2.2.4.1.1 GhBOP1、GhBOP2、GhBOP1-2 基因部分序列的扩增与回收 | 第31-32页 |
| 2.2.4.1.2 目的片段和载体的双酶切与回收 | 第32-33页 |
| 2.2.4.1.3 目的片段与载体的连接 | 第33页 |
| 2.2.4.1.4 将连接产物热激到大肠杆菌DH5α感受态细胞中 | 第33-34页 |
| 2.2.4.1.5 通过菌落PCR筛选阳性克隆 | 第34页 |
| 2.2.4.1.6 重组质粒的提取与酶切验证 | 第34-36页 |
| 2.2.4.1.7 目的基因的测序 | 第36页 |
| 2.2.4.2 农杆菌介导的棉花基因BOP1、BOP2、BOP1-2 的VIGS | 第36-39页 |
| 2.2.4.2.1 农杆菌感受态细胞GV3101的制备 | 第36页 |
| 2.2.4.2.2 重组载体转化农杆菌GV3101感受态细胞 | 第36-37页 |
| 2.2.4.2.3 农杆菌菌落PCR的检测 | 第37页 |
| 2.2.4.2.4 摇菌 | 第37-38页 |
| 2.2.4.2.5 扩大培养 | 第38页 |
| 2.2.4.2.6 菌液的重悬与OD值的测定 | 第38页 |
| 2.2.4.2.7 VIGS棉花幼苗的获得 | 第38-39页 |
| 2.2.4.2.8 棉花的注射与培养 | 第39页 |
| 2.2.4.3 通过VIGS植株的半定量PCR检测 | 第39-41页 |
| 2.2.4.4 大丽轮枝菌V991的侵染 | 第41-42页 |
| 2.2.4.4.1 大丽轮枝菌V991的培养 | 第41页 |
| 2.2.4.4.2 大丽轮枝菌V991的浓度的调节 | 第41-42页 |
| 2.2.4.4.3 大丽轮枝菌V991的接种 | 第42页 |
| 2.2.4.4.4 棉花染病后对表型的观察统计 | 第42页 |
| 2.3 GhBOP1蛋白的原核诱导及纯化 | 第42-47页 |
| 2.3.1 GhBOP1原核载体的构建 | 第42-44页 |
| 2.3.1.1 带有EcoR I与BamH I酶切位点的GhBOP1扩增与纯化 | 第43页 |
| 2.3.1.2 载体与目的片段的酶切 | 第43页 |
| 2.3.1.3 目的基因与表达载体的连接 | 第43-44页 |
| 2.3.1.4 转化感受态大肠杆菌 | 第44页 |
| 2.3.1.5 通过菌落PCR筛选阳性克隆 | 第44页 |
| 2.3.1.6 重组质粒的提取与检测 | 第44页 |
| 2.3.2 工程菌的制备 | 第44页 |
| 2.3.3 GhBOP1蛋白的诱导 | 第44-45页 |
| 2.3.4 GhBOP1蛋白的分离与纯化（HIS标签） | 第45-47页 |
| 2.4 GhNPR1蛋白的原核诱导及纯化 | 第47-49页 |
| 2.4.1 GhNPR1原核载体的构建 | 第47-48页 |
| 2.4.1.1 带有BamH I与EcoR I酶切位点的GhNPR1的扩增纯化 | 第47页 |
| 2.4.1.2 载体与目的片段的酶切与回收 | 第47-48页 |
| 2.4.1.3 目的基因与表达载体的连接 | 第48页 |
| 2.4.1.4 转化感受态大肠杆菌 | 第48页 |
| 2.4.1.5 通过菌落PCR筛选阳性克隆 | 第48页 |
| 2.4.1.6 重组质粒的提取与检测 | 第48页 |
| 2.4.2 工程菌的制备 | 第48页 |
| 2.4.3 NPR1蛋白的诱导 | 第48-49页 |
| 2.4.4 GhNPR1蛋白的分离和纯化（GST标签） | 第49页 |
| 2.5 虫荧光素酶互补试验(LCI) | 第49-50页 |
| 2.6 过表达烟草的转化 | 第50-53页 |
| 2.6.1 GhBOP1过表达载体的构建 | 第50页 |
| 2.6.2 农杆菌的电击转化 | 第50页 |
| 2.6.3 SR1烟草无菌苗的培养 | 第50-51页 |
| 2.6.4 烟草转化 | 第51页 |
| 2.6.5 转基因烟草植株的PCR检测 | 第51-52页 |
| 2.6.5.1 提取转基因烟草苗及野生型烟草的基因组DNA | 第51-52页 |
| 2.6.5.2 转基因烟草的检测 | 第52页 |
| 2.6.6 转基因烟草的抗病性分析 | 第52-53页 |
| 第三章 结果与分析 | 第53-66页 |
| 3.1 棉花总RNA的提取 | 第53页 |
| 3.2 棉花GhBOP2基因的扩增与序列分析 | 第53页 |
| 3.3 GhBOP2蛋白的同源性分析 | 第53-55页 |
| 3.4 GhBOP2蛋白的系统进化树分析 | 第55页 |
| 3.5 病毒诱导基因沉默载体的构建 | 第55-57页 |
| 3.5.1 棉花GhBOP1、GhBOP2与GhBOP1/2 基因片段的获得 | 第55-56页 |
| 3.5.2 VIGS载体的构建及所获得工程菌的检测 | 第56-57页 |
| 3.6 棉花基因GhBOP1、GhBOP2与GhBOP1/2 沉默后抗病分析 | 第57-60页 |
| 3.6.1 沉默后半定量PCR检测 | 第57-58页 |
| 3.6.2 GhBOP1基因沉默后表型观察 | 第58-59页 |
| 3.6.3 接菌后表型的观察 | 第59-60页 |
| 3.6.4 发病情况分析 | 第60页 |
| 3.7 带His标签的GhBOP1蛋白的诱导和纯化 | 第60-61页 |
| 3.8 带GST标签的NPR1蛋白的诱导和纯化 | 第61-62页 |
| 3.9 虫荧光素酶互补试验(LCI) | 第62-63页 |
| 3.10 转基因烟草的抗病分析 | 第63-66页 |
| 3.10.1 转基因烟草植株的获得 | 第63-64页 |
| 3.10.2 转基因烟草植株的检测 | 第64页 |
| 3.10.3 转基因烟草植株的抗病性分析 | 第64-66页 |
| 第四章 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
| 吴家和导师简介 | 第79-80页 |
| 司怀军导师简介 | 第80页 |
