| 摘要 | 第4-9页 |
| ABSTRACT | 第9-14页 |
| 缩略词表 | 第15-18页 |
| 第一章 文献综述 IGF1和TIMP1及毛囊发育相关基因的研究进展 | 第18-26页 |
| 1. IGF1的信号通路及生理功能 | 第18-20页 |
| 1.1 IGF1的分类及其结构特征 | 第18-19页 |
| 1.2 IGF1的相关生理作用及信号通路 | 第19-20页 |
| 1.3 IGF1对血管生成及肿瘤的作用 | 第20页 |
| 2. IGF1对毛囊发育的作用 | 第20-21页 |
| 3. TIMP1的分类及其结构功能特征 | 第21-22页 |
| 4. TIMP1的信号通路及生理功能 | 第22-23页 |
| 5. PTEN和VEGF的信号通路及生理功能 | 第23-26页 |
| 5.1 PTEN的信号通路和生理功能 | 第23页 |
| 5.2 VEGF的信号通路和生理功能 | 第23-26页 |
| 第二章 IGF1和TIMP1对绒山羊毛乳头细胞发育过程中相关信号通路的调控研究 | 第26-72页 |
| 1 引言 | 第26-29页 |
| 1.1 IGF1和TIMP1基因在绒山羊毛乳头细胞的表达检测 | 第26-27页 |
| 1.2 IGF1和TIMP1基因过表达和干扰载体的构建、鉴定及细胞的转染 | 第27-28页 |
| 1.3 IGF1和TIMP1基因对毛乳头细胞中AKT和ERK1/2信号通路及相关基因表达影响的检测 | 第28-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-48页 |
| 2.1 材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 主要材料、试剂及耗材 | 第29-30页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.2 方法 | 第30-48页 |
| 2.2.1 SHF-DPCs和PHF-DPCs中相关基因的检测 | 第30-39页 |
| 2.2.1.1 SHF-DPCs和PHF-DPCs的解冻、培养及冻存 | 第30-31页 |
| 2.2.1.2 提取SHF-DPCs和PHF-DPCs的总RNA和总蛋白,并反转 | 第31-33页 |
| 2.2.1.3 进行实时定量PCR和蛋白免疫印迹实验 | 第33-39页 |
| 2.2.2 载体构建 | 第39-47页 |
| 2.2.2.1 克隆载体构建 | 第39-42页 |
| 2.2.2.2 过表达载体构建 | 第42-45页 |
| 2.2.2.3 干扰载体的构建 | 第45页 |
| 2.2.2.4 过表达载体的鉴定 | 第45页 |
| 2.2.2.5 过表达和干扰载体效率检测 | 第45-47页 |
| 2.2.3 IGF1和TIMP1基因对毛乳头细胞中AKT和ERK1/2信号通路及相关基因表达影响的检测 | 第47-48页 |
| 2.2.3.1 转染 | 第47页 |
| 2.2.3.2 提细胞总RNA和总蛋白 | 第47页 |
| 2.2.3.3 进行实时定量PCR和蛋白免疫印迹实验 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-66页 |
| 3.1 毛乳头细胞中IGF1、TIMP1和相关信号通路基因的检测 | 第48-50页 |
| 3.1.1 毛乳头细胞中IGF1、TIMP1和相关信号通路基因mRNA的检测 | 第48-49页 |
| 3.1.2 毛乳头细胞中IGF1、TIMP1和相关信号通路基因蛋白表达的检测 | 第49-50页 |
| 3.2 IGF1和TIMP1基因过表达和干扰载体的构建、鉴定及细胞的转染 | 第50-57页 |
| 3.2.1 克隆IGF1和TIMP1基因CDS序列的结果 | 第50-51页 |
| 3.2.2 构建IGF1和TIMP1基因的pIRES2-EGFP表达载体结果 | 第51页 |
| 3.2.3 PHF-DPCs和SHF-DPCs转染条件 | 第51-52页 |
| 3.2.4 pIRES2-EGFP-IGF1和pIRES2-EGFP-TIMP1表达载体转染PHF-DPCs结果 | 第52-53页 |
| 3.2.5 pIRES2-EGFP-IGF1和pIRES2-EGFP-TIMP1过表达效率的检测结果 | 第53页 |
| 3.2.6 IGF1和TIMP1干扰载体转染PHF-DPCs结果 | 第53-56页 |
| 3.2.7 IGF1和TIMP1干扰载体干扰效率的检测结果 | 第56-57页 |
| 3.3 IGF1和TIMP1基因对毛乳头细胞中AKT和ERK1/2信号通路及相关基因表达影响的检测 | 第57-66页 |
| 3.3.1 质粒转染结果 | 第57-58页 |
| 3.3.2 IGF1对相关信号通路基因及相关基因的mRNA水平影响 | 第58-59页 |
| 3.3.3 TIMP1对毛乳头细胞相关信号通路及相关基因的mRNA水平的调控 | 第59-62页 |
| 3.3.4 IGF1对毛乳头细胞相关信号通路基因的蛋白及磷酸化影响 | 第62-64页 |
| 3.3.5 TIMP1对毛乳头细胞相关信号通路基因的蛋白及磷酸化调控 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-72页 |
| 4.1 IGF1和TIMP1在初级和次级毛乳头细胞中的检测分析 | 第66-67页 |
| 4.1.1 IGF1和TIMP1在初级和次级毛乳头细胞中的检测分析 | 第66-67页 |
| 4.1.2 ERK1/2和AKT在初级和次级毛乳头细胞中的检测分析 | 第67页 |
| 4.1.3 KDR、VEGF、MMP9和PTEN在初级和次级毛乳头细胞中的检测分析 | 第67页 |
| 4.2 IGF1和TIMP1基因过表达和干扰载体的构建、鉴定及细胞的转染 | 第67-69页 |
| 4.2.1 过表达和干扰载体干扰载体的应用分析 | 第67-68页 |
| 4.2.2 pIRES2-EGFP载体的应用分析 | 第68页 |
| 4.2.3 转染方法选择及优化 | 第68-69页 |
| 4.3 IGF1和TIMP1基因对毛乳头细胞中AKT和ERK1/2信号通路及相关基因表达影响的检测 | 第69-72页 |
| 4.3.1 IGF1对毛乳头细胞AKT、ERK1/2和VEGF基因mRNA水平的影响分析 | 第69页 |
| 4.3.2 毛乳头细胞中IGF1对AKT和ERK1/2的蛋白表达水平的检测分析 | 第69页 |
| 4.3.3 毛乳头细胞中IGF1对AKT和ERK1/2的蛋白磷酸化水平的检测分析 | 第69-70页 |
| 4.3.4 TIMP1对毛乳头细胞MMP9、VEGF、KDR和PTEN基因mRNA水平的影响分析 | 第70-71页 |
| 4.3.5 毛乳头细胞中TIMP对AKT和ERK1/2的蛋白表达水平的检测分析 | 第71页 |
| 4.3.6 毛乳头细胞中TIMP对AKT和ERK1/2的蛋白磷酸化水平的检测分析 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
