摘要 | 第7-8页 |
ABSTRACT | 第8页 |
缩略词表(ABBREVIATIONS) | 第9-10页 |
1 前言 | 第10-18页 |
1.1 研究问题的由来 | 第10-11页 |
1.2 miRNA在免疫系统中的作用 | 第11-13页 |
1.2.1 动物细胞miRNA简介 | 第11-12页 |
1.2.2 miRNA影响免疫细胞的发育 | 第12-13页 |
1.2.3 miRNA对免疫应答的调控作用 | 第13页 |
1.3 miR-155 对免疫系统的作用 | 第13-15页 |
1.3.1 miR-155 在免疫反应中的作用 | 第13-14页 |
1.3.2 miR-155 靶基因研究进展 | 第14-15页 |
1.4 转录因子Foxp3 研究进展 | 第15-17页 |
1.4.1 调节性T细胞的免疫功能 | 第15-16页 |
1.4.2 Foxp3 在调节性T细胞中的功能 | 第16页 |
1.4.3 Foxp3 直接靶向调控miR-155 对调节性T细胞的作用 | 第16-17页 |
1.5 研究的目的与意义 | 第17-18页 |
2 技术路线、材料与方法 | 第18-37页 |
2.1 技术路线 | 第18页 |
2.2 材料 | 第18-23页 |
2.2.1 猪组织样品 | 第18-19页 |
2.2.2 细胞系、载体、菌株 | 第19-20页 |
2.2.3 主要试验试剂 | 第20-21页 |
2.2.4 主要生化试剂的配置 | 第21-22页 |
2.2.5 主要数据库和生物学软件 | 第22-23页 |
2.3 方法 | 第23-37页 |
2.3.1 SNP分析 | 第23-24页 |
2.3.2 细胞培养 | 第24-25页 |
2.3.3 细胞转染试验 | 第25页 |
2.3.4 基因表达量分析 | 第25-28页 |
2.3.5 载体的构建及相关试验方法 | 第28-32页 |
2.3.6 蛋白表达量分析 | 第32-33页 |
2.3.7 染色质免疫共沉淀实验 | 第33-37页 |
3 结果 | 第37-47页 |
3.1 与转录因子Foxp3 结合情况的研究 | 第37-41页 |
3.1.1 大白及梅山Bic基因片段SNP分析 | 第37-38页 |
3.1.2 Flag-Foxp3-pcDNA3.1 载体构建及超表达检测 | 第38-39页 |
3.1.3 ChIP实验检测Foxp3 结合位点 | 第39-40页 |
3.1.4 双荧光实验检测A/C型片段与Foxp3 的结合效率 | 第40-41页 |
3.2 miR-155 表达差异及靶基因研究 | 第41-47页 |
3.2.1 杜二F2 群体中检测miR-155 全血白细胞中表达水平 | 第41-42页 |
3.2.2 Ssc-miR-155 候选靶基因预测 | 第42-43页 |
3.2.3 Ssc-miR-155 候选靶基因初步筛选 | 第43-45页 |
3.2.4 miR155pEGFP-C1 载体构建及超表达检测 | 第45-46页 |
3.2.5 ssc-miR-155 候选靶基因双荧光检测 | 第46-47页 |
4 讨论 | 第47-52页 |
4.1 关于Foxp3 蛋白在Bic基因上结合位点研究的讨论 | 第47-48页 |
4.1.1 猪Bic基因Foxp3 结合位点分析 | 第47-48页 |
4.1.2 猪Bic基因突变对Foxp3 结合差异的影响 | 第48页 |
4.2 关于miR-155 及靶基因研究的讨论 | 第48-50页 |
4.2.1 全血白细胞中AA型和CC型miR-155 差异表达 | 第48-49页 |
4.2.2 ssc-miR-155 候选靶基因的预测和筛选 | 第49-50页 |
4.2.3 ssc-miR-155 候选靶基因研究分析 | 第50页 |
4.3 关于下一步工作的计划 | 第50-52页 |
5 小结 | 第52-54页 |
5.1 本研究的主要结果 | 第52页 |
5.2 本研究的创新点与特色 | 第52-53页 |
5.3 本研究的不足之处以及有待解决的问题 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-61页 |
致谢 | 第61页 |