| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 符号说明 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1 人双艾柯病毒的研究进展 | 第10-22页 |
| ·病原学 | 第11-15页 |
| ·流行病学 | 第15-16页 |
| ·HPeV 的检测方法 | 第16-22页 |
| 2 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章HPeV VP1 基因的原核表达及其产物的抗原性分析 | 第23-42页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·毒株、菌株和质粒 | 第23页 |
| ·血清 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-33页 |
| ·病毒总RNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25页 |
| ·套式RT-PCR 及靶基因VP1 的扩增 | 第25-27页 |
| ·目的片段的纯化回收 | 第27-28页 |
| ·目的基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·原核表达载体pET-28a-VP1 的构建 | 第29-31页 |
| ·重组表达载体的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·表达产物的纯化 | 第32页 |
| ·表达产物的复性 | 第32页 |
| ·纯化产物的Western blot 鉴定 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-39页 |
| ·VP1 基因的PCR 结果 | 第33-34页 |
| ·目的基因的克隆鉴定 | 第34页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·蛋白的原核表达 | 第35-37页 |
| ·蛋白的可溶性分析 | 第37页 |
| ·蛋白的纯化与复性 | 第37-38页 |
| ·蛋白的Western blot 分析 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| 第三章HPeV 间接ELISA 检测方法的建立及初步应用 | 第42-56页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| ·抗原的制备 | 第42页 |
| ·血清 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| ·间接ELISA 方法的基本操作程序 | 第43页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的选择 | 第43-44页 |
| ·抗原包被条件的选择 | 第44页 |
| ·封闭液及封闭时间的选择 | 第44-45页 |
| ·血清作用时间的选择 | 第45页 |
| ·酶标二抗最佳稀释度的选择 | 第45页 |
| ·底物显色时间的选择 | 第45页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第45页 |
| ·特异性试验 | 第45-46页 |
| ·重复性试验 | 第46页 |
| ·间接ELISA 与微量中和实验比较 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-53页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第46-47页 |
| ·抗原包被条件的确定 | 第47-48页 |
| ·封闭液及封闭时间的确定 | 第48-49页 |
| ·血清最适作用时间的确定 | 第49页 |
| ·酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第49-50页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第50页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第50-51页 |
| ·特异性试验 | 第51页 |
| ·重复性试验 | 第51-52页 |
| ·临床样品的检测 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 第四章HPeV SYBR Green I 荧光定量PCR 检测方法的建立及初步应用 | 第56-69页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| ·阳性病料与临床样本 | 第56-57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-61页 |
| ·引物的设计与合成 | 第57-58页 |
| ·病毒RNA 的提取及cDNA 的合成 | 第58页 |
| ·标准阳性模板的制备 | 第58-60页 |
| ·SYBR Green I 荧光定量PCR 反应体系的建立和优化 | 第60页 |
| ·标准曲线的建立 | 第60页 |
| ·SYBR Green I 荧光定量PCR 方法的评价 | 第60-61页 |
| ·SYBR Green I 荧光定量PCR 与套式RT-PCR 检测临床样品比较 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-67页 |
| ·靶基因的扩增及标准品的定量 | 第61-62页 |
| ·SYBR Green I 荧光定量PCR 反应体系的确定 | 第62页 |
| ·标准曲线的绘制与融解曲线分析 | 第62-64页 |
| ·特异性评价 | 第64-65页 |
| ·敏感性评价 | 第65-66页 |
| ·重复性和稳定性 | 第66-67页 |
| ·临床样品检测 | 第67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录1 试剂配制 | 第78-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
