| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩写词汇注释 | 第10-17页 |
| 第1章 绪论 | 第17-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第17-23页 |
| 1.1.1 microRNAs概述 | 第17-19页 |
| 1.1.2 microRNAs的研究概述 | 第19-20页 |
| 1.1.3 家蚕microRNAs的研究概述 | 第20-21页 |
| 1.1.4 microRNAs在昆虫免疫中的作用 | 第21-23页 |
| 1.2 本课题的理论意义与实用价值 | 第23-24页 |
| 1.3 本课题研究内容与研究方法 | 第24-25页 |
| 第2章 bmo-miR-217 和bmo-miR-390 靶基因预测 | 第25-34页 |
| 引言 | 第25页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-26页 |
| 2.1.1 实验材料与所用试剂 | 第25页 |
| 2.1.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第25-26页 |
| 2.1.2.1 样品准备 | 第25-26页 |
| 2.1.2.2 高通量测序 | 第26页 |
| 2.1.2.3 miRNAs靶基因获取及预测 | 第26页 |
| 2.2 结果与分析 | 第26-32页 |
| 2.2.1 bmo-mi R-217 和bmo-miR-390 的靶基因预测 | 第26-32页 |
| 2.3 讨论 | 第32-33页 |
| 2.4 本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 bmo-miR-217 及bmo-miR-390 的克隆及表达量分析 | 第34-48页 |
| 引言 | 第34页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-42页 |
| 3.1.1 试验材料与所用试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.1.1 供试家蚕品种及病毒 | 第34页 |
| 3.1.1.2 宿主菌、载体及相关试剂 | 第34页 |
| 3.1.1.3 相关缓冲液及试剂的配制 | 第34-35页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第35-42页 |
| 3.1.2.1 试验样品准备 | 第35-36页 |
| 3.1.2.2 感受态细胞制备 | 第36页 |
| 3.1.2.3 家蚕血淋巴组织总RNA提取 | 第36-37页 |
| 3.1.2.4 DNaseⅠ处理总RNA | 第37页 |
| 3.1.2.5 cDNA合成反应 | 第37-38页 |
| 3.1.2.6 PCR验证 | 第38-39页 |
| 3.1.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第39页 |
| 3.1.2.8 目的片段DNA的回收 | 第39-40页 |
| 3.1.2.9 回收DNA片段与pMD18-T载体的连接反应 | 第40页 |
| 3.1.2.10 连接产物的转化 | 第40页 |
| 3.1.2.11 克隆测序 | 第40页 |
| 3.1.2.12 用qRT-PCR分析miRNA表达量 | 第40-41页 |
| 3.1.2.13 用qRT-PCR检测家蚕miRNAs及其靶基因在血淋巴组织中的表达 | 第41-42页 |
| 3.2 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.2.1 bmo-mi R-217 及bmo-miR-390 克隆验证 | 第42页 |
| 3.2.2 bmo-mi R-217 和bmo-miR-390 定量表达分析 | 第42-44页 |
| 3.2.3 不同感染时间家蚕miRNAs和BmNPV基因在家蚕血淋巴组织中的表达 | 第44-46页 |
| 3.2.3.1 不同感染时间bmo-miR-217 和BmNPV-lef-1 基因在家蚕血淋巴中的表达 | 第44页 |
| 3.2.3.2 不同感染时间bmo-miR-390 和BmNPV-cg30基因在家蚕血淋巴中的表达 | 第44-46页 |
| 3.3 讨论 | 第46-47页 |
| 3.4 本章小结 | 第47-48页 |
| 第4章 bmo-miR-217及bmo-miR-390功能的初步研究 | 第48-64页 |
| 引言 | 第48页 |
| 4.1 材料与方法 | 第48-55页 |
| 4.1.1 试验材料及试剂 | 第48-50页 |
| 4.1.1.1 试验材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1.2 所用试剂及耗材 | 第49页 |
| 4.1.1.3 试剂制备 | 第49-50页 |
| 4.1.2 试验仪器与设备 | 第50页 |
| 4.1.3 试验方法 | 第50-55页 |
| 4.1.3.1 miRNAs表达载体构建 | 第50-52页 |
| 4.1.3.1.1 基因组DNA提取 | 第50-51页 |
| 4.1.3.1.2 miRNAs前体克隆 | 第51页 |
| 4.1.3.1.3 质粒回收及双酶切产物回收 | 第51页 |
| 4.1.3.1.4 目的产物连接反应及双酶切鉴定 | 第51-52页 |
| 4.1.3.2 靶基因 3’UTR表达载体构建 | 第52-53页 |
| 4.1.3.2.1 家蚕血淋巴总RNA提取及cDNA的合成 | 第52页 |
| 4.1.3.2.2 靶基因 3’UTR克隆 | 第52页 |
| 4.1.3.2.3 质粒回收及双酶切产物回收 | 第52-53页 |
| 4.1.3.2.4 目的产物连接反应及双酶切鉴定 | 第53页 |
| 4.1.3.3 重组表达载体共转染家蚕BmN细胞 | 第53-54页 |
| 4.1.3.4 双荧光素酶活性检测 | 第54页 |
| 4.1.3.5 qRT-PCR检测BmNPV感染家蚕BmN细胞BmNPV-cg30基因的表达量 | 第54-55页 |
| 4.2 结果与分析 | 第55-61页 |
| 4.2.1 miRNAs表达载体构建 | 第55-57页 |
| 4.2.1.1 bmo-mi R-217、bmo-miR-390前体PCR结果 | 第55-56页 |
| 4.2.1.2 bmo-mir-217、bmo-mir-390 双酶切鉴定结果 | 第56-57页 |
| 4.2.2 miRNAs靶基因 3’UTR表达载体构建 | 第57-58页 |
| 4.2.2.1 BmNPV-lef-13’UTR、BmNPV-cg303’UTR的PCR结果 | 第57页 |
| 4.2.2.2 BmNPV-lef-13’UTR、BmNPV-cg303’UTR双酶切鉴定结果 | 第57-58页 |
| 4.2.3 双荧光素酶活性检测 | 第58-60页 |
| 4.2.3.1 bmo-mi R-217 对BmNPV-lef-1 具有抑制作用 | 第58-59页 |
| 4.2.3.2 bmo-mi R-390 对BmNPV-cg30基因表达有下调作用 | 第59-60页 |
| 4.2.4 在感染BmNPV的BmN细胞中bmo-mi R-390 抑制BmNPV-cg30基因的表达 | 第60-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-63页 |
| 4.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
