| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 抗菌肽的分类 | 第9-10页 |
| 1.2 抗菌肽的作用机制 | 第10-11页 |
| 1.3 抗菌肽研究存在的问题 | 第11页 |
| 1.4 抗菌肽的应用前景 | 第11-12页 |
| 1.5 海胆抗菌肽研究现状 | 第12-13页 |
| 1.6 选题依据和研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 抗菌肽基因SiStrongylocin1和SiStrongylocin2的筛选及全长CDS克隆 | 第15-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 实验用海胆 | 第15页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第15页 |
| 2.1.3 溶液与培养基 | 第15页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第15-16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-21页 |
| 2.2.1 抗菌肽基因片段的获得和cDNA的克隆 | 第16-17页 |
| 2.2.2 取样和RNA提取 | 第17-18页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第18-19页 |
| 2.2.3.1 用于克隆验证的第一链cDNA | 第18页 |
| 2.2.3.2 用于 5'RACE和 3'RACE的第一链cDNA | 第18-19页 |
| 2.2.4 克隆验证和获得全长CDS | 第19-20页 |
| 2.2.4.1 用PCR克隆验证抗菌肽基因片段 | 第19页 |
| 2.2.4.2 用RACE克隆获得全长CDS | 第19-20页 |
| 2.2.5 抗菌肽基因的序列分析 | 第20-21页 |
| 2.3 结果 | 第21-25页 |
| 2.3.1 组织总RNA的提取与检测 | 第21页 |
| 2.3.2 SiStrongylocin1和SiStrongylocin2基因片段验证和CDS全长的获得 | 第21-22页 |
| 2.3.3 SiStrongylocin1和SiStrongylocin2的信号肽预测 | 第22-23页 |
| 2.3.4 SiStrongylocin1和SiStrongylocin2成熟肽三级结构预测 | 第23页 |
| 2.3.5 SiStrongylocin1和SiStrongylocin2同源氨基酸序列比对及系统进化分析 | 第23-25页 |
| 2.4 讨论 | 第25页 |
| 2.5 小结 | 第25-26页 |
| 第三章 虾夷马粪海胆抗菌肽的表达特征分析 | 第26-32页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 实验用海胆 | 第26页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第26页 |
| 3.1.3 溶液 | 第26页 |
| 3.1.4 荧光实时定量引物 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-28页 |
| 3.2.1 取样和RNA提取 | 第27页 |
| 3.2.2 cDNA第一链的合成 | 第27页 |
| 3.2.3 荧光实时定量PCR | 第27-28页 |
| 3.2.4 荧光实时定量PCR数据分析 | 第28页 |
| 3.3 结果 | 第28-30页 |
| 3.3.1 引物特异性及扩增 | 第28-29页 |
| 3.3.2 抗菌肽的表达分析 | 第29-30页 |
| 3.4 讨论 | 第30页 |
| 3.5 小结 | 第30-32页 |
| 第四章 虾夷马粪海胆抗菌肽的原核表达及抑菌活性分析 | 第32-44页 |
| 4.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 4.1.1 实验用海胆 | 第32页 |
| 4.1.2 试剂 | 第32页 |
| 4.1.3 溶液和培养基 | 第32-33页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第33页 |
| 4.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 4.2.1 取样及RNA提取 | 第33页 |
| 4.2.2 cDNA第一链的合成 | 第33页 |
| 4.2.3 设计引物和选择酶切位点 | 第33页 |
| 4.2.4 构建重组子 | 第33-34页 |
| 4.2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| 4.2.6 SDS-PAGE电泳检测重组蛋白的表达 | 第34页 |
| 4.2.7 重组蛋白可溶性分析 | 第34-35页 |
| 4.2.8 重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第35页 |
| 4.2.9 重组蛋白的分离纯化 | 第35-36页 |
| 4.2.10 蛋白浓缩 | 第36页 |
| 4.2.11 重组蛋白抑菌分析 | 第36-37页 |
| 4.3 结果 | 第37-42页 |
| 4.3.1 抗菌肽目的片段的克隆 | 第37-38页 |
| 4.3.2 抗菌肽重组子的构建 | 第38页 |
| 4.3.3 表达感受态细胞的选择及目的蛋白的诱导表达 | 第38-39页 |
| 4.3.4 目的蛋白可溶性分析 | 第39-40页 |
| 4.3.5 优化目的蛋白表达条件 | 第40-41页 |
| 4.3.6 目的蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 4.3.7 目的蛋白抑菌活性分析 | 第42页 |
| 4.4 讨论 | 第42-43页 |
| 4.5 小结 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 攻读学位期间发表的论文目录 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-52页 |
