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力生长因子对大鼠肌腱细胞运动能力及损伤肌腱修复的影响

中文摘要第3-6页
英文摘要第6-8页
英汉缩略名词对照表第14-16页
1 绪论第16-26页
    1.1 问题的提出第16页
    1.2 国内外研究现状第16-23页
        1.2.1 肌腱的组成及功能特性第16-19页
        1.2.2 肌腱损伤第19-20页
        1.2.3 损伤肌腱的修复第20-21页
        1.2.4 力生长因子第21-23页
    1.3 研究意义第23页
    1.4 本文研究目的、主要内容和技术路线第23-26页
        1.4.1 研究目的第23页
        1.4.2 研究内容第23-24页
        1.4.3 技术路线第24-26页
2 大鼠肌腱细胞的原代分离培养及鉴定第26-38页
    2.1 引言第26页
    2.2 实验材料第26-30页
        2.2.1 实验动物第26-27页
        2.2.2 主要仪器设备和耗材第27页
        2.2.3 主要实验药品与试剂第27-28页
        2.2.4 主要实验试剂的配制第28-30页
    2.3 实验方法第30-34页
        2.3.1 大鼠肌腱细胞的分离培养第30页
        2.3.2 RT-PCR检测肌腱细胞相关标志物的表达第30-32页
        2.3.3 Western blot检测肌腱细胞相关标志物的表达第32-34页
    2.4 实验结果第34-36页
        2.4.1 形态学观察第34-35页
        2.4.2 标志分子的mRNA检测结果第35-36页
        2.4.3 标志分子的蛋白检测结果第36页
    2.5 分析讨论第36-37页
    2.6 本章小结第37-38页
3 MGF-C25E对大鼠肌腱细胞运动能力的影响第38-64页
    3.1 引言第38页
    3.2 实验材料第38-42页
        3.2.1 主要仪器、耗材第38-39页
        3.2.2 主要实验药品与试剂第39-41页
        3.2.3 主要实验试剂的配制第41-42页
    3.3 实验方法第42-48页
        3.3.1 MTT测量第42-43页
        3.3.2 细胞运动的测量第43-44页
        3.3.3 Western blot检测蛋白表达第44页
        3.3.4 明胶酶谱检测MMPs分泌第44-46页
        3.3.5 免疫荧光染色观察细胞骨架蛋白F-actin第46-47页
        3.3.6 原子力显微镜(AFM)测量细胞杨氏模量第47-48页
    3.4 实验结果第48-60页
        3.4.1 MGF-C25E对肌腱细胞增殖的影响第48页
        3.4.2 MGF-C25E对肌腱细胞运动能力的影响第48-50页
        3.4.3 MGF-C25E通过FAK-ERK1/2 信号通路促进肌腱细胞迁移和侵袭第50-54页
        3.4.4 MGF-C25E通过FAK-ERK1/2 信号通路增加MMP-2 分泌促进肌腱细胞侵袭第54-57页
        3.4.5 MGF-C25E对肌腱细胞杨氏模量的影响第57-58页
        3.4.6 MGF-C25E对肌腱细胞F-actin的影响第58-60页
    3.5 分析讨论第60-62页
        3.5.1 MGF-C25E对肌腱细胞增殖无影响第60页
        3.5.2 FAK-ERK1/2 信号通路在MGF-C25E影响的细胞迁移及侵袭中的作用第60页
        3.5.3 MMP-2 在MGF-C25E促肌腱细胞侵袭中的作用第60-61页
        3.5.4 MGF-C25E影响的细胞硬度与细胞骨架重排的关系第61-62页
    3.6 本章小结第62-64页
4 核力学特性在MGF-C25E促大鼠肌腱细胞迁移中的作用第64-86页
    4.1 引言第64页
    4.2 实验材料第64-68页
        4.2.1 主要仪器、耗材第64-65页
        4.2.2 主要实验药品与试剂第65-66页
        4.2.3 主要实验试剂的配制第66-68页
    4.3 实验方法第68-73页
        4.3.1 细胞核的提取第68页
        4.3.2 原子力显微镜测量细胞核杨氏模量第68-69页
        4.3.3 q RT-PCR 检测 Lamin A/C 基因水平的表达第69-71页
        4.3.4 Western blot实验第71页
        4.3.5 免疫荧光染色第71-72页
        4.3.6 原位DNaseI敏感性实验第72-73页
        4.3.7 MTT测量同 3.3.1第73页
    4.4 实验结果第73-81页
        4.4.1 MGF-C25E通过FAK-ERK1/2 信号通路增加肌腱细胞核硬度第73-74页
        4.4.2 MGF-C25E 对细胞核骨架蛋白 Lamin A/C 表达的影响第74页
        4.4.3 MGF-C25E对细胞核染色质浓缩的影响第74-77页
        4.4.4 MGF-C25E对DNA甲基化的影响第77-78页
        4.4.5 DNA甲基化对MGF-C25E影响的染色质浓缩、细胞核硬度以及细胞迁移的影响第78-81页
    4.5 分析讨论第81-84页
        4.5.1 细胞核硬度对细胞运动的影响第81-82页
        4.5.2 细胞核骨架蛋白Lamin A/C对细胞核硬度的影响第82-83页
        4.5.3 染色质浓缩对细胞核硬度及细胞迁移的影响第83页
        4.5.4 DNA甲基化对染色质浓缩的影响第83-84页
        4.5.5 MGF-C25E对大鼠肌腱细胞硬度与细胞核硬度的不同影响第84页
    4.6 本章小结第84-86页
5 MGF-C25E对损伤肌腱细胞的影响第86-96页
    5.1 引言第86-87页
    5.2 实验材料第87页
        5.2.1 主要仪器、耗材第87页
        5.2.2 主要实验药品与试剂第87页
        5.2.3 主要实验试剂的配制第87页
    5.3 实验方法第87-89页
        5.3.1 大鼠肌腱细胞损伤模型的构建第87-89页
        5.3.2 qRT-PCR检测相关基因的表达方法同 4.3.3第89页
    5.4 实验结果第89-92页
        5.4.1 机械拉伸构建大鼠肌腱细胞损伤模型第89-90页
        5.4.2 TNF-α 构建大鼠肌腱细胞损伤模型第90-91页
        5.4.3 MGF-C25E对损伤肌腱细胞的影响第91-92页
    5.5 分析讨论第92-94页
        5.5.1 10%形变、1Hz机械加载 24 h对大鼠肌腱细胞炎症因子的表达无明显作用第92-93页
        5.5.2 TNF-α 构建大鼠肌腱细胞损伤模型第93页
        5.5.3 MGF-C25E降低TNF-α 促进的COX-2 和PGE2 mRNA表达第93-94页
        5.5.4 MGF-C25E对TNF-α 降低的Collagen I和Collagen III mRNA表达无明显作用第94页
    5.6 本章小结第94-96页
6 MGF-C25E对大鼠损伤跟腱的在体修复作用第96-110页
    6.1 引言第96页
    6.2 实验材料第96-97页
        6.2.1 实验动物第96页
        6.2.2 主要仪器、耗材第96-97页
        6.2.3 主要实验药品与试剂第97页
        6.2.4 主要实验试剂的配制第97页
    6.3 实验方法第97-103页
        6.3.1 实验设计和分组第97-98页
        6.3.2 大鼠跟腱损伤模型的构建第98-99页
        6.3.3 给药第99页
        6.3.4 跟腱功能指数(Achilles functional index,AFI)测量第99-100页
        6.3.5 组织形态观察第100页
        6.3.6 生物力学评估第100页
        6.3.7 组织学评估第100-103页
    6.4 实验结果第103-107页
        6.4.1 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱AFI的影响第103-104页
        6.4.2 修复肌腱的形态观察第104-105页
        6.4.3 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱生物力学特性的影响第105页
        6.4.4 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱组织结构的影响第105-107页
    6.5 分析讨论第107-108页
        6.5.1 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱功能恢复的影响第107页
        6.5.2 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱力学特性的影响第107-108页
    6.6 本章小结第108-110页
7 全文总结与展望第110-112页
    7.1 主要结论第110页
    7.2 后续工作展望第110-112页
致谢第112-114页
参考文献第114-124页
附录第124页
    A. 作者攻读博士学位期间参与的科研项目第124页
    B. 作者攻读博士学位期间的论文第124页

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