中文摘要 | 第3-6页 |
英文摘要 | 第6-8页 |
英汉缩略名词对照表 | 第14-16页 |
1 绪论 | 第16-26页 |
1.1 问题的提出 | 第16页 |
1.2 国内外研究现状 | 第16-23页 |
1.2.1 肌腱的组成及功能特性 | 第16-19页 |
1.2.2 肌腱损伤 | 第19-20页 |
1.2.3 损伤肌腱的修复 | 第20-21页 |
1.2.4 力生长因子 | 第21-23页 |
1.3 研究意义 | 第23页 |
1.4 本文研究目的、主要内容和技术路线 | 第23-26页 |
1.4.1 研究目的 | 第23页 |
1.4.2 研究内容 | 第23-24页 |
1.4.3 技术路线 | 第24-26页 |
2 大鼠肌腱细胞的原代分离培养及鉴定 | 第26-38页 |
2.1 引言 | 第26页 |
2.2 实验材料 | 第26-30页 |
2.2.1 实验动物 | 第26-27页 |
2.2.2 主要仪器设备和耗材 | 第27页 |
2.2.3 主要实验药品与试剂 | 第27-28页 |
2.2.4 主要实验试剂的配制 | 第28-30页 |
2.3 实验方法 | 第30-34页 |
2.3.1 大鼠肌腱细胞的分离培养 | 第30页 |
2.3.2 RT-PCR检测肌腱细胞相关标志物的表达 | 第30-32页 |
2.3.3 Western blot检测肌腱细胞相关标志物的表达 | 第32-34页 |
2.4 实验结果 | 第34-36页 |
2.4.1 形态学观察 | 第34-35页 |
2.4.2 标志分子的mRNA检测结果 | 第35-36页 |
2.4.3 标志分子的蛋白检测结果 | 第36页 |
2.5 分析讨论 | 第36-37页 |
2.6 本章小结 | 第37-38页 |
3 MGF-C25E对大鼠肌腱细胞运动能力的影响 | 第38-64页 |
3.1 引言 | 第38页 |
3.2 实验材料 | 第38-42页 |
3.2.1 主要仪器、耗材 | 第38-39页 |
3.2.2 主要实验药品与试剂 | 第39-41页 |
3.2.3 主要实验试剂的配制 | 第41-42页 |
3.3 实验方法 | 第42-48页 |
3.3.1 MTT测量 | 第42-43页 |
3.3.2 细胞运动的测量 | 第43-44页 |
3.3.3 Western blot检测蛋白表达 | 第44页 |
3.3.4 明胶酶谱检测MMPs分泌 | 第44-46页 |
3.3.5 免疫荧光染色观察细胞骨架蛋白F-actin | 第46-47页 |
3.3.6 原子力显微镜(AFM)测量细胞杨氏模量 | 第47-48页 |
3.4 实验结果 | 第48-60页 |
3.4.1 MGF-C25E对肌腱细胞增殖的影响 | 第48页 |
3.4.2 MGF-C25E对肌腱细胞运动能力的影响 | 第48-50页 |
3.4.3 MGF-C25E通过FAK-ERK1/2 信号通路促进肌腱细胞迁移和侵袭 | 第50-54页 |
3.4.4 MGF-C25E通过FAK-ERK1/2 信号通路增加MMP-2 分泌促进肌腱细胞侵袭 | 第54-57页 |
3.4.5 MGF-C25E对肌腱细胞杨氏模量的影响 | 第57-58页 |
3.4.6 MGF-C25E对肌腱细胞F-actin的影响 | 第58-60页 |
3.5 分析讨论 | 第60-62页 |
3.5.1 MGF-C25E对肌腱细胞增殖无影响 | 第60页 |
3.5.2 FAK-ERK1/2 信号通路在MGF-C25E影响的细胞迁移及侵袭中的作用 | 第60页 |
3.5.3 MMP-2 在MGF-C25E促肌腱细胞侵袭中的作用 | 第60-61页 |
3.5.4 MGF-C25E影响的细胞硬度与细胞骨架重排的关系 | 第61-62页 |
3.6 本章小结 | 第62-64页 |
4 核力学特性在MGF-C25E促大鼠肌腱细胞迁移中的作用 | 第64-86页 |
4.1 引言 | 第64页 |
4.2 实验材料 | 第64-68页 |
4.2.1 主要仪器、耗材 | 第64-65页 |
4.2.2 主要实验药品与试剂 | 第65-66页 |
4.2.3 主要实验试剂的配制 | 第66-68页 |
4.3 实验方法 | 第68-73页 |
4.3.1 细胞核的提取 | 第68页 |
4.3.2 原子力显微镜测量细胞核杨氏模量 | 第68-69页 |
4.3.3 q RT-PCR 检测 Lamin A/C 基因水平的表达 | 第69-71页 |
4.3.4 Western blot实验 | 第71页 |
4.3.5 免疫荧光染色 | 第71-72页 |
4.3.6 原位DNaseI敏感性实验 | 第72-73页 |
4.3.7 MTT测量同 3.3.1 | 第73页 |
4.4 实验结果 | 第73-81页 |
4.4.1 MGF-C25E通过FAK-ERK1/2 信号通路增加肌腱细胞核硬度 | 第73-74页 |
4.4.2 MGF-C25E 对细胞核骨架蛋白 Lamin A/C 表达的影响 | 第74页 |
4.4.3 MGF-C25E对细胞核染色质浓缩的影响 | 第74-77页 |
4.4.4 MGF-C25E对DNA甲基化的影响 | 第77-78页 |
4.4.5 DNA甲基化对MGF-C25E影响的染色质浓缩、细胞核硬度以及细胞迁移的影响 | 第78-81页 |
4.5 分析讨论 | 第81-84页 |
4.5.1 细胞核硬度对细胞运动的影响 | 第81-82页 |
4.5.2 细胞核骨架蛋白Lamin A/C对细胞核硬度的影响 | 第82-83页 |
4.5.3 染色质浓缩对细胞核硬度及细胞迁移的影响 | 第83页 |
4.5.4 DNA甲基化对染色质浓缩的影响 | 第83-84页 |
4.5.5 MGF-C25E对大鼠肌腱细胞硬度与细胞核硬度的不同影响 | 第84页 |
4.6 本章小结 | 第84-86页 |
5 MGF-C25E对损伤肌腱细胞的影响 | 第86-96页 |
5.1 引言 | 第86-87页 |
5.2 实验材料 | 第87页 |
5.2.1 主要仪器、耗材 | 第87页 |
5.2.2 主要实验药品与试剂 | 第87页 |
5.2.3 主要实验试剂的配制 | 第87页 |
5.3 实验方法 | 第87-89页 |
5.3.1 大鼠肌腱细胞损伤模型的构建 | 第87-89页 |
5.3.2 qRT-PCR检测相关基因的表达方法同 4.3.3 | 第89页 |
5.4 实验结果 | 第89-92页 |
5.4.1 机械拉伸构建大鼠肌腱细胞损伤模型 | 第89-90页 |
5.4.2 TNF-α 构建大鼠肌腱细胞损伤模型 | 第90-91页 |
5.4.3 MGF-C25E对损伤肌腱细胞的影响 | 第91-92页 |
5.5 分析讨论 | 第92-94页 |
5.5.1 10%形变、1Hz机械加载 24 h对大鼠肌腱细胞炎症因子的表达无明显作用 | 第92-93页 |
5.5.2 TNF-α 构建大鼠肌腱细胞损伤模型 | 第93页 |
5.5.3 MGF-C25E降低TNF-α 促进的COX-2 和PGE2 mRNA表达 | 第93-94页 |
5.5.4 MGF-C25E对TNF-α 降低的Collagen I和Collagen III mRNA表达无明显作用 | 第94页 |
5.6 本章小结 | 第94-96页 |
6 MGF-C25E对大鼠损伤跟腱的在体修复作用 | 第96-110页 |
6.1 引言 | 第96页 |
6.2 实验材料 | 第96-97页 |
6.2.1 实验动物 | 第96页 |
6.2.2 主要仪器、耗材 | 第96-97页 |
6.2.3 主要实验药品与试剂 | 第97页 |
6.2.4 主要实验试剂的配制 | 第97页 |
6.3 实验方法 | 第97-103页 |
6.3.1 实验设计和分组 | 第97-98页 |
6.3.2 大鼠跟腱损伤模型的构建 | 第98-99页 |
6.3.3 给药 | 第99页 |
6.3.4 跟腱功能指数(Achilles functional index,AFI)测量 | 第99-100页 |
6.3.5 组织形态观察 | 第100页 |
6.3.6 生物力学评估 | 第100页 |
6.3.7 组织学评估 | 第100-103页 |
6.4 实验结果 | 第103-107页 |
6.4.1 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱AFI的影响 | 第103-104页 |
6.4.2 修复肌腱的形态观察 | 第104-105页 |
6.4.3 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱生物力学特性的影响 | 第105页 |
6.4.4 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱组织结构的影响 | 第105-107页 |
6.5 分析讨论 | 第107-108页 |
6.5.1 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱功能恢复的影响 | 第107页 |
6.5.2 MGF-C25E对损伤大鼠跟腱力学特性的影响 | 第107-108页 |
6.6 本章小结 | 第108-110页 |
7 全文总结与展望 | 第110-112页 |
7.1 主要结论 | 第110页 |
7.2 后续工作展望 | 第110-112页 |
致谢 | 第112-114页 |
参考文献 | 第114-124页 |
附录 | 第124页 |
A. 作者攻读博士学位期间参与的科研项目 | 第124页 |
B. 作者攻读博士学位期间的论文 | 第124页 |