| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语 | 第11-13页 |
| 第1章 综述 | 第13-25页 |
| 1.1 玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus) | 第13-14页 |
| 1.1.1 概述 | 第13页 |
| 1.1.2 S.roseosporus产生的次级代谢产物 | 第13-14页 |
| 1.2 达托霉素 | 第14-21页 |
| 1.2.1 A21978C概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 达托霉素的发展历史 | 第15-16页 |
| 1.2.3 达托霉素的理化性质 | 第16页 |
| 1.2.4 达托霉素的抗菌机理 | 第16页 |
| 1.2.5 达托霉素的市场状况 | 第16-17页 |
| 1.2.6 达托霉素的生物合成 | 第17-19页 |
| 1.2.7 S.roseosporus产达托霉素的研究 | 第19-21页 |
| 1.3 支链α酮酸脱氢酶的研究现状 | 第21-23页 |
| 1.3.1 概述 | 第21-22页 |
| 1.3.2 链霉菌中支链α酮酸脱氢酶的研究现状 | 第22-23页 |
| 1.4 本实验的研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-30页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第27-28页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第28页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.6 所用引物 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-41页 |
| 2.2.1 大肠杆菌的生长及保藏 | 第30页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的快速提取及重组菌株的筛选鉴定 | 第30页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态制备及转化 | 第30-31页 |
| 2.2.4 DNA的酶切反应 | 第31页 |
| 2.2.5 质粒与DNA片段的连接反应 | 第31-32页 |
| 2.2.6 S.roseosporus的培养及孢子悬液的制备 | 第32页 |
| 2.2.7 接合转移 | 第32-33页 |
| 2.2.8 S.roseosporus基因组DNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.9 S.roseosporus质粒的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.10 RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.11 DNase I处理RNA样品 | 第35页 |
| 2.2.12 RNA浓度和纯度的检测 | 第35-36页 |
| 2.2.13 PCR、RNA反转录、实时荧光定量PCR | 第36-38页 |
| 2.2.14 癸酸耐受检测 | 第38页 |
| 2.2.15 细胞膜脂肪酸组成鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.16 抗生素产量测定 | 第39页 |
| 2.2.17 达托霉素标准曲线的建立 | 第39-40页 |
| 2.2.18 不同碳源下体生长检测 | 第40页 |
| 2.2.19 序列分析工具 | 第40-41页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第41-55页 |
| 3.1 S roseosporus中支链a酮酸脱氢酶(BCDH)基因的克隆和分析 | 第41-42页 |
| 3.1.1 bkd1的克隆和分析 | 第41页 |
| 3.1.2 bkd2的克隆和分析 | 第41-42页 |
| 3.2 载体构建以及重组菌株的筛选 | 第42-47页 |
| 3.2.1 bkd1敲除载体和bkd2敲除载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.2 bkd1敲除菌株和bkd2敲除菌株的筛选 | 第44-45页 |
| 3.2.3 bkd1过表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.4 bkd1过表达菌株的筛选 | 第46-47页 |
| 3.2.5 bkd1遗传互补株的获得 | 第47页 |
| 3.3 bkd1对S.roseosporus支链碳源利用的影响 | 第47-48页 |
| 3.4 支链α酮酸脱氢酶(BCDH)对S.roseosporus癸酸耐受的影响 | 第48-49页 |
| 3.5 支链α酮酸脱氢酶(BCDH)对S.roseosporus细胞膜脂肪酸组分的影响 | 第49-51页 |
| 3.6 支链α酮酸脱氢酶(BCDH)在S.roseosporus中的转录水平 | 第51-52页 |
| 3.7 支链α酮酸脱氢酶(BCDH)对A21978C生物合成的影响 | 第52-55页 |
| 3.7.1 bkd1敲除对A21978C生物合成的影响 | 第52-53页 |
| 3.7.2 bkd1过表达对A21978C生物合成的影响 | 第53-55页 |
| 第4章 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 S.roseosporus中BCDH基因bkd1和bkd2的确定 | 第55页 |
| 4.2 S.roseosporus中支链α酮酸脱氢酶(BCDH)的功能 | 第55-59页 |
| 4.2.1 S.roseosporus中bkd1对支链氨基酸代谢的影响 | 第55-56页 |
| 4.2.2 S.roseosporus中BCDH对支链脂肪酸合成的影响 | 第56页 |
| 4.2.3 S.roseosporus中bkd1对A21978C生物合成的影响 | 第56-57页 |
| 4.2.4 S.roseosporus中bkd2对A21978C生物合成的影响 | 第57-59页 |
| 第5章 总结 | 第59-61页 |
| 5.1 总结 | 第59-60页 |
| 5.2 创新点 | 第60页 |
| 5.3 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 硕士期间发表论文与奖励情况 | 第67页 |
