| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 动物细胞培养技术概况及治疗性抗体类药物的发展 | 第11-13页 |
| 1.1.1 动物细胞培养技术概况 | 第11页 |
| 1.1.2 治疗性抗体类药物的发展 | 第11-13页 |
| 1.2 治疗性抗体类药物的结构特点 | 第13-25页 |
| 1.2.1 单克隆抗体药物的结构特点 | 第13-15页 |
| 1.2.2 TNFR-Fc融合蛋白概述及结构特点 | 第15-25页 |
| 1.3 抗体类药物的变异体及其质量控制 | 第25页 |
| 1.4 TNFR-Fc融合蛋白生产过程中遇到的问题 | 第25-26页 |
| 1.5 本文研究内容、目的及意义 | 第26-27页 |
| 第2章 材料与方法 | 第27-33页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第27页 |
| 2.2 分析方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 液相疏水作用色谱 | 第27页 |
| 2.2.2 液相分子排阻色谱 | 第27页 |
| 2.2.3 蛋白质粒径的检测 | 第27-28页 |
| 2.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳及三种不同的染色方法 | 第28页 |
| 2.2.5 糖基含量以及唾液酸的检测 | 第28-29页 |
| 2.2.6 还原性与非还原性胰酶切肽图法 | 第29-30页 |
| 2.2.7 木瓜蛋白酶酶切非还原样品 | 第30页 |
| 2.2.8 rProtein A纯化分离TNFR和Fc | 第30页 |
| 2.2.9 基质辅助激光解析飞行时间质谱 | 第30页 |
| 2.2.10 圆二色谱分析 | 第30-31页 |
| 2.2.11 生物学活性检测 | 第31页 |
| 2.2.12 热稳定性检测 | 第31页 |
| 2.2.13 氧化还原条件下的冷模实验 | 第31-32页 |
| 2.2.14 蛋白样品的悬滴法结晶操作及X射线晶体衍射 | 第32-33页 |
| 第3章 TNFR-Fc异构体的分离 | 第33-37页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第33-36页 |
| 3.2.1 经典三步纯化法纯化后的TNFR-Fc融合蛋白的纯度和疏水性分析 | 第33-34页 |
| 3.2.2 AKTA制备型疏水作用层析分离制备异构体Peak A和Peak B | 第34-36页 |
| 3.3 本章小结 | 第36-37页 |
| 第4章 TNFR-Fc异构体的结构研究 | 第37-49页 |
| 4.1 引言 | 第37页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第37-48页 |
| 4.2.1 Peak A和Peak B分析型疏水作用色谱的比较 | 第37-38页 |
| 4.2.2 Peak A和Peak B的粒径比较 | 第38页 |
| 4.2.3 Peak A和Peak B的分子量分析 | 第38-39页 |
| 4.2.4 Peak A和Peak B的N-糖糖基化及唾液酸的比较 | 第39-41页 |
| 4.2.5 Peak A和Peak B的一级结构分析 | 第41-45页 |
| 4.2.6 Peak A和Peak B的二级结构分析 | 第45-46页 |
| 4.2.7 Peak A和Peak B的三级结构分析 | 第46页 |
| 4.2.8 Peak A和Peak B的结晶结果及Peak A的初步晶体衍射结果 | 第46-48页 |
| 4.3 本章小结 | 第48-49页 |
| 第5章 TNFR-Fc异构体的有效性、稳定性分析 | 第49-57页 |
| 5.1 引言 | 第49页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第49-56页 |
| 5.2.1 Peak A和Peak B的生物学活性的比较 | 第49-50页 |
| 5.2.2 Peak A和Peak B的热稳定性分析 | 第50页 |
| 5.2.3 Peak A和Peak B的熔点温度分析 | 第50-53页 |
| 5.2.4 Peak A和Peak B受不同氧化还原剂的影响 | 第53-56页 |
| 5.3 本章小结 | 第56-57页 |
| 第6章 全文总结及展望 | 第57-59页 |
| 6.1 全文总结 | 第57-58页 |
| 6.2 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
