| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第18-21页 |
| 2 背景回顾 | 第21-47页 |
| 2.1 肝细胞癌 | 第21-35页 |
| 2.1.1 流行分布 | 第21-22页 |
| 2.1.2 病因流行病学 | 第22-26页 |
| 2.1.3 诊断现状 | 第26-28页 |
| 2.1.4 治疗现状 | 第28-35页 |
| 2.2 Fbxw7研究现状 | 第35-42页 |
| 2.2.1 Fbxw7亚型特异性与底物识别 | 第36页 |
| 2.2.2 Fbxw7底物 | 第36-38页 |
| 2.2.3 SCF~(Fbxw7)泛素化调节因子 | 第38-39页 |
| 2.2.4 人类肿瘤中Fbxw7失活的机制 | 第39-40页 |
| 2.2.5 Fbxw7失活的后果 | 第40-42页 |
| 2.3 Hippo-YAP信号通路与HCC | 第42-46页 |
| 2.3.1 果蝇和人类的Hippo信号通路 | 第42-43页 |
| 2.3.2 YAP与肝脏体积调控 | 第43-44页 |
| 2.3.3 Hippo-YAP通路与HCC发生发展 | 第44-45页 |
| 2.3.4 Hippo通路上游组分与HCC | 第45页 |
| 2.3.5 YAP候选靶基因与HCC | 第45-46页 |
| 2.4 泛素化调控YAP蛋白的相关研究 | 第46-47页 |
| 3 材料与方法 | 第47-71页 |
| 3.1 临床资料 | 第47-48页 |
| 3.2 实验动物 | 第48页 |
| 3.3 标本处理 | 第48-49页 |
| 3.4 细胞培养 | 第49页 |
| 3.5 工作液配置 | 第49页 |
| 3.6 实验试剂 | 第49-50页 |
| 3.7 实验方法 | 第50-70页 |
| 3.7.1 免疫组织化学染色检测Fbxw7在HCC及对应癌旁组织中的表达 | 第50-51页 |
| 3.7.2 Real-time RT-PCR检测Fbxw7 mRNA在各细胞系中的表达 | 第51-52页 |
| 3.7.3 Flag-Fbxw7和HA-YAP逆转录病毒包装 | 第52页 |
| 3.7.4 HepG2细胞转染Flag-Fbxw7和EV | 第52页 |
| 3.7.5 Real-time RT-PCR检测Fbxw7 mRNA在HepG2细胞中的表达 | 第52-53页 |
| 3.7.6 Western blot检测Fbxw7蛋白在HepG2细胞中的表达 | 第53-54页 |
| 3.7.7 流式细胞术检测HepG2细胞凋亡 | 第54页 |
| 3.7.8 Caspase3/7活性分析检测HepG2细胞凋亡 | 第54页 |
| 3.7.9 BrdU细胞增殖分析检测HepG2细胞增殖能力 | 第54-55页 |
| 3.7.10 MTT法检测HepG2细胞活力 | 第55页 |
| 3.7.11 Hep3B细胞转染Fbxw7 shRNA和NT shRNA | 第55页 |
| 3.7.12 Real-time RT-PCR检测Fbxw7 mRNA在Hep3B细胞中的表达 | 第55-56页 |
| 3.7.13 Western blot检测Fbxw7蛋白在Hep3B细胞中的表达 | 第56页 |
| 3.7.14 流式细胞术检测Hep3B细胞凋亡 | 第56-57页 |
| 3.7.15 Caspase3/7活性分析检测Hep3B细胞凋亡 | 第57页 |
| 3.7.16 BrdU细胞增殖分析检测Hep3B细胞增殖能力 | 第57页 |
| 3.7.17 MTT法检测Hep3B细胞活力 | 第57页 |
| 3.7.18 免疫组织化学染色检测YAP在HCC及对应癌旁组织中的表达 | 第57-58页 |
| 3.7.19 Real-time RT-PCR检测YAP mRNA在HepG2细胞中的表达 | 第58-59页 |
| 3.7.20 Western blot检测YAP蛋白在HepG2细胞中的表达 | 第59-60页 |
| 3.7.21 细胞免疫荧光染色检测YAP蛋白在HepG2细胞中的表达 | 第60页 |
| 3.7.22 Real-time RT-PCR检测YAP mRNA在Hep3B细胞中的表达 | 第60-61页 |
| 3.7.23 Western blot检测YAP蛋白在Hep3B细胞中的表达 | 第61页 |
| 3.7.24 细胞免疫荧光染色检测YAP蛋白在Hep3B细胞中的表达 | 第61-62页 |
| 3.7.25 HEK293细胞共转染Flag-Fbxw7和HA-YAP | 第62页 |
| 3.7.26 蛋白质免疫共沉淀检测Fbxw7与YAP的相互作用 | 第62-63页 |
| 3.7.27 HepG2细胞共转染HA-YAP和Flag-Fbxw7 | 第63页 |
| 3.7.28 蛋白质免疫共沉淀检测HepG2细胞YAP蛋白泛素化水平 | 第63-64页 |
| 3.7.29 CHX追踪实验检测HepG2细胞中YAP蛋白半衰期 | 第64-65页 |
| 3.7.30 Hep3B细胞共转染Flag-Fbxw7和HA-YAP | 第65页 |
| 3.7.31 Western blot检测Fbxw7和YAP蛋白在Hep3B细胞中的表达 | 第65-66页 |
| 3.7.32 流式细胞术检测Hep3B细胞凋亡 | 第66页 |
| 3.7.33 Caspase3/7活性分析检测Hep3B细胞凋亡 | 第66页 |
| 3.7.34 BrdU细胞增殖分析检测Hep3B细胞增殖能力 | 第66-67页 |
| 3.7.35 MTT法检测Hep3B细胞活力 | 第67页 |
| 3.7.36 裸鼠皮下种植瘤模型构建 | 第67页 |
| 3.7.37 免疫组织化学染色检测YAP在裸鼠皮下肿瘤组织中的表达 | 第67-68页 |
| 3.7.38 免疫组织化学染色检测Ki-67在裸鼠皮下肿瘤组织中的表达 | 第68-69页 |
| 3.7.39 裸鼠皮下肿瘤组织TUNEL染色 | 第69-70页 |
| 3.8 统计学分析 | 第70-71页 |
| 4 实验结果 | 第71-89页 |
| 4.1 Fbxw7在HCC及对应癌旁组织中的表达 | 第71-72页 |
| 4.2 Fbxw7与HCC临床病理特征的相关性 | 第72-73页 |
| 4.3 Fbxw7 mRNA在正常肝细胞及HCC细胞中的表达 | 第73-74页 |
| 4.4 Fbxw7对肝癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第74-78页 |
| 4.4.1 Fbxw7过表达导致HepG2细胞生长停滞 | 第74-75页 |
| 4.4.2 Fbxw7过表达诱导HepG2细胞凋亡 | 第75-76页 |
| 4.4.3 敲低Fbxw7导致Hep3B细胞生长加速 | 第76-77页 |
| 4.4.4 敲低Fbxw7抑制Hep3B细胞凋亡 | 第77-78页 |
| 4.5 YAP在HCC及对应癌旁组织中的表达 | 第78-79页 |
| 4.6 HCC组织中Fbxw7与YAP蛋白表达相关性 | 第79-80页 |
| 4.7 肝癌细胞中Fbxw7对YAP蛋白的调控 | 第80-82页 |
| 4.7.1 Fbxw7过表达下调HepG2细胞中YAP蛋白表达水平 | 第80-81页 |
| 4.7.2 敲低Fbxw7上调Hep3B细胞中YAP蛋白表达水平 | 第81-82页 |
| 4.8 肝癌细胞中Fbxw7泛素化蛋白酶解YAP蛋白 | 第82-84页 |
| 4.8.1 Fbxw7与YAP蛋白存在相互作用 | 第82-83页 |
| 4.8.2 Fbxw7过表达导致HepG2细胞中YAP蛋白泛素化水平增加 | 第83页 |
| 4.8.3 Fbxw7过表达导致HepG2细胞中YAP蛋白半衰期缩短 | 第83-84页 |
| 4.8.4 MG132逆转HepG2细胞中Fbxw7对YAP蛋白的调控 | 第84页 |
| 4.9 Fbxw7通过泛素化降解YAP蛋白抑制肝癌细胞体外生长 | 第84-86页 |
| 4.9.1 Fbxw7通过下调YAP蛋白导致Hep3B细胞生长阻滞 | 第84-86页 |
| 4.9.2 Fbxw7通过下调YAP蛋白诱导Hep3B细胞凋亡 | 第86页 |
| 4.10 Fbxw7通过泛素化降解YAP蛋白抑制肝癌细胞体内生长 | 第86-89页 |
| 4.10.1 Fbxw7通过下调YAP蛋白抑制肿瘤生长 | 第86-87页 |
| 4.10.2 Fbxw7通过下调YAP蛋白抑制Hep3B细胞体内生长 | 第87-88页 |
| 4.10.3 Fbxw7通过下调YAP蛋白诱导Hep3B细胞体内凋亡 | 第88-89页 |
| 5 讨论 | 第89-94页 |
| 5.1 Fbxw7在HCC中的表达及临床意义 | 第89-90页 |
| 5.2 Fbxw7通过泛素化降解YAP蛋白诱导肝癌细胞凋亡和生长阻滞 | 第90-94页 |
| 6 结论与展望 | 第94-95页 |
| 6.1 结论 | 第94页 |
| 6.2 展望 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第105-107页 |
