| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 大肠杆菌融合标签研究进展 | 第8-10页 |
| 1.1.1 大肠杆菌可溶性表达外源蛋白研究进展 | 第8-9页 |
| 1.1.2 融合标签研究进展 | 第9-10页 |
| 1.2 氨基酸标签(SETs) | 第10-11页 |
| 1.3 酸性普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶 | 第11-12页 |
| 1.4 本论文研究意义和主要研究内容 | 第12-14页 |
| 1.4.1 本论文研究意义 | 第12页 |
| 1.4.2 本论文主要研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-21页 |
| 2.1 材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 培养基 | 第14页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第15页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第15-16页 |
| 2.2 方法 | 第16-21页 |
| 2.2.1 重组菌BL21(DE3)-pET28a(+)-pelB-Bapul13A的构建 | 第16页 |
| 2.2.2 培养条件及发酵优化 | 第16页 |
| 2.2.3 25株Ba Pul13A变体菌的构建 | 第16-18页 |
| 2.2.4 细胞分级处理 | 第18页 |
| 2.2.5 普鲁兰酶活的测定 | 第18页 |
| 2.2.6 生物信息学工具 | 第18-19页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR | 第19-20页 |
| 2.2.8 细胞内外膜通透性的测定 | 第20-21页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第21-47页 |
| 3.1 重组菌BL21(DE3)-pET28a(+)-pelB-Bapul13A的构建及发酵优化 | 第21-25页 |
| 3.1.1 重组菌BL21(DE3)-pET28a(+)-pelB-Bapul13A的构建 | 第21页 |
| 3.1.2 不同培养基对重组菌表达分泌普鲁兰酶的影响 | 第21-22页 |
| 3.1.3 温度对重组菌表达分泌普鲁兰酶的影响 | 第22-23页 |
| 3.1.4 IPTG浓度对重组菌表达分泌普鲁兰酶的影响 | 第23-24页 |
| 3.1.5 诱导时机对重组菌表达分泌普鲁兰酶的影响 | 第24-25页 |
| 3.1.6 小结 | 第25页 |
| 3.2 25株BaPul13A变体菌的构建及发酵 | 第25-38页 |
| 3.2.1 25株BaPul13A变体菌的构建 | 第25-28页 |
| 3.2.2 平行发酵 | 第28-37页 |
| 3.2.3 小结 | 第37-38页 |
| 3.3 差异化表达机理的初步探究 | 第38-47页 |
| 3.3.1 从细胞水平上分析膜通透性的变化 | 第38-39页 |
| 3.3.2 从RNA水平上分析差异化表达机理 | 第39-44页 |
| 3.3.3 从普鲁兰酶二级结构预测水平上分析 | 第44-45页 |
| 3.3.4 小结 | 第45-47页 |
| 主要结论与展望 | 第47-49页 |
| 主要结论 | 第47页 |
| 展望 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
