| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)概述 | 第7-9页 |
| 1.1.1 CGTase菌株来源 | 第7页 |
| 1.1.2 CGTase的催化机制及其应用 | 第7-8页 |
| 1.1.3 CGTase的制备及国内外研究现状 | 第8-9页 |
| 1.2 环糊精(CD)概述 | 第9-13页 |
| 1.2.1 CD的性质、功能及应用 | 第9-10页 |
| 1.2.2 CD的制备工艺及国内外研究现状 | 第10-11页 |
| 1.2.3 影响CD转化率的因素 | 第11-12页 |
| 1.2.4 CD生产的国内外研究现状 | 第12-13页 |
| 1.3 短小芽孢杆菌概述 | 第13-14页 |
| 1.4 立题依据及意义 | 第14页 |
| 1.5 本论文主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-21页 |
| 2.1 菌种与质粒 | 第15页 |
| 2.2 试剂 | 第15页 |
| 2.3 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.4 分子生物学操作 | 第16-18页 |
| 2.4.1 cgt基因的克隆 | 第16页 |
| 2.4.2 E. coli JM109感受态细胞的转化 | 第16页 |
| 2.4.3 E. coli JM109质粒提取 | 第16-17页 |
| 2.4.4 重组表达载体构建及鉴定 | 第17页 |
| 2.4.5 B. brevis感受态细胞的制备 | 第17-18页 |
| 2.4.6 重组B. brevis的构建与筛选 | 第18页 |
| 2.5 细胞培养 | 第18-19页 |
| 2.5.1 培养基 | 第18页 |
| 2.5.2 培养方法 | 第18-19页 |
| 2.6 分析方法 | 第19页 |
| 2.6.1 菌浓(OD600)的测定 | 第19页 |
| 2.6.2 细胞干重测定 | 第19页 |
| 2.6.3 CGTase酶活测定 | 第19页 |
| 2.6.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第19页 |
| 2.7 β-CD的制备及检测 | 第19-21页 |
| 2.7.1 β-CD制备流程 | 第19-20页 |
| 2.7.2 β-CD的检测方法 | 第20页 |
| 2.7.3 转化率的计算 | 第20-21页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第21-38页 |
| 3.1 表达CGTase的工程菌的构建 | 第21-25页 |
| 3.1.1 产CGTase基因工程菌的构建 | 第21-22页 |
| 3.1.2 碳源对CGTase表达量的影响 | 第22-23页 |
| 3.1.3 无机氮源对CGTase胞外生产的影响 | 第23-24页 |
| 3.1.4 有机氮源对CGTase胞外生产的影响 | 第24页 |
| 3.1.5 金属离子对CGTase胞外生产的影响 | 第24-25页 |
| 3.2 产CGTase的重组菌的 3.6 L罐发酵条件优化 | 第25-27页 |
| 3.2.1 温度对CGTase表达量的影响 | 第25页 |
| 3.2.2 氮源配比对CGTase表达量的影响 | 第25-26页 |
| 3.2.3 初始葡萄糖含量对CGTase表达量的影响 | 第26-27页 |
| 3.3 木糖启动子在B. brevis中的应用 | 第27-31页 |
| 3.3.1 表达载体pNC-pxyl的构建 | 第27-28页 |
| 3.3.2 重组表达载体pNC-pxyl-cgt的构建 | 第28-29页 |
| 3.3.3 重组菌pNC-pxyl-cgt的诱导表达 | 第29页 |
| 3.3.4 诱导强度对重组菌pNC-pxyl-cgt表达量的影响 | 第29-30页 |
| 3.3.5 诱导温度对重组菌pNC-pxyl-cgt表达量的影响 | 第30页 |
| 3.3.6 诱导时机对重组菌pNC-pxyl-cgt表达量的影响 | 第30-31页 |
| 3.4 重组CGTase制备 β-CD | 第31-38页 |
| 3.4.1 底物浓度对 β-CD转化率的影响 | 第32页 |
| 3.4.2 反应时间对 β-CD转化率的影响 | 第32-33页 |
| 3.4.3 初始pH对 β-CD转化率的影响 | 第33页 |
| 3.4.4 反应温度对 β-CD转化率的影响 | 第33-34页 |
| 3.4.5 环糊精葡萄糖基转移酶加量对 β-CD转化率的影响 | 第34-35页 |
| 3.4.6 pH对普鲁兰酶与CGTase同步转化的影响 | 第35页 |
| 3.4.7 温度对普鲁兰酶与CGTase同步转化的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.8 普鲁兰酶与CGTase加酶量对 β-CD转化率的影响 | 第36-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 主要结论 | 第38页 |
| 展望 | 第38-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44页 |
