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Cytophaga hutchinsonii纤维素降解关键基因和高效启动子序列的筛选鉴定

摘要第7-9页
Abstract第9-11页
缩略词表(Abbrevation)第12-13页
第一章 绪论第13-35页
    1.1 纤维素的生物降解策略第13-17页
        1.1.1 游离纤维素酶协同降解第14-15页
        1.1.2 纤维小体酶系第15-16页
        1.1.3 细胞结合型纤维素降解体系第16-17页
    1.2 细菌的膜转运蛋白第17-27页
        1.2.1 外膜转运蛋白第17-25页
        1.2.2 内膜转运蛋白第25-27页
    1.3 细菌中甲硫氨酸的来源第27-31页
        1.3.1 甲硫氨酸的生物合成第27-31页
        1.3.2 甲硫氨酸的转运第31页
    1.4 C. hutchinsonii的研究进展第31-32页
    1.5 论文的立题依据和研究内容第32-35页
第二章 chu_0089 (TonB-dependent-receptor)的插入失活菌株的构建及性质研究第35-61页
    2.1 材料方法第35-44页
        2.1.1 菌种质粒第35-36页
        2.1.2 引物第36-37页
        2.1.3 生物信息学分析网站第37页
        2.1.4 试剂仪器第37页
        2.1.5 培养条件第37-38页
        2.1.6 常规分子生物学方法第38页
        2.1.7 电转化第38-39页
        2.1.8 生长测定第39页
        2.1.9 逆转录-PCR第39-41页
        2.1.10 全菌体的纤维素吸附第41-42页
        2.1.11 外膜蛋白对纤维素的吸附第42-43页
        2.1.12 全菌体纤维素酶活的测定第43页
        2.1.13 菌体的葡萄糖吸收第43-44页
    2.2 结果与讨论第44-59页
        2.2.1 CHU_0089的序列分析第44-45页
        2.2.2 chu_0089的基因座位分析第45页
        2.2.3 chu_0089单插入失活菌株构建第45-47页
        2.2.4 0089in在不同碳源下的生长测定第47-48页
        2.2.5 0089in菌株的chu_0090转录情况的分析第48-49页
        2.2.6 回补菌株构建第49-51页
        2.2.7 纤维素吸附实验第51-52页
        2.2.8 0089in纤维素酶活检测第52-53页
        2.2.9 0089in的葡萄糖吸收第53-54页
        2.2.10 0089in在基础盐(Stanier)培养基中的生长测定第54-57页
        2.2.11 0089in的外膜蛋白的提取第57-58页
        2.2.12 0089in发酵液的pH变化第58-59页
    2.3 本章小结第59-61页
第三章 C. hutchinsonii转座诱变突变株的筛选、chu_0694和chu_1812插入失活突变株构建及性质研究第61-75页
    3.1 材料方法第61-65页
        3.1.1 菌种质粒第61-62页
        3.1.2 引物第62页
        3.1.3 生物信息学分析网站第62-63页
        3.1.4 试剂仪器第63页
        3.1.5 培养条件第63页
        3.1.6 常规分子生物学方法第63页
        3.1.7 电转化第63页
        3.1.8 转座突变株的筛选与插入位点的确定第63-64页
        3.1.9 Southern blot验证第64页
        3.1.10 生长测定第64页
        3.1.11 菌体边缘扩散第64-65页
        3.1.12 单菌体运动观察第65页
    3.2 结果与讨论第65-73页
        3.2.1 转座突变株插入位点的鉴定第65-66页
        3.2.2 关于T964插入位点的Southern blot验证第66页
        3.2.3 chu_0694与chu_1812单插入失活菌株的构建第66-68页
        3.2.4 转座突变株及单插入失活菌株的滤纸生长实验第68-69页
        3.2.5 转座突变株的菌落边缘扩散及运动观察第69-70页
        3.2.6 chu_0694与chu_1812的功能分析第70-71页
        3.2.7 转座突变株在不同氮源及碳源培养基中的生长测定第71-72页
        3.2.8 单插入失活菌株在添加甲硫氨酸的滤纸平板上的生长测定第72-73页
    3.3 本章小结第73-75页
第四章 C. hutchinsonii中高效表达启动子序列的筛选第75-93页
    4.1 材料方法第75-82页
        4.1.1 菌种质粒第75-76页
        4.1.2 引物第76-79页
        4.1.3 生物信息学分析网站第79-80页
        4.1.4 试剂仪器第80页
        4.1.5 培养条件第80页
        4.1.6 常规分子生物学方法第80页
        4.1.7 电转化第80页
        4.1.8 逆转录PCR第80页
        4.1.9 荧光显微镜的观察第80-81页
        4.1.10 荧光强度定量分析第81页
        4.1.11 ONPG酶活的测定第81-82页
    4.2 结果与讨论第82-91页
        4.2.1 以GFP为报告基因检测启动子启动表达能力第82-84页
        4.2.2 以LacZ及CAT为报告基因检测启动子启动表达能力第84-88页
        4.2.3 GFP与基因融合表达菌株的荧光检测第88-90页
        4.2.4 GFP表达菌株关于GFP的转录分析第90-91页
    4.3 本章小结第91-93页
全文总结第93-95页
参考文献第95-100页
致谢第100-101页
学位论文评阅及答辩情况表第101页

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