猪脑心肌炎病毒NJ08株感染性cDNA克隆构建及拯救病毒生物学特性
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 上篇 文献综述 | 第11-39页 |
| 第一章 脑心肌炎病毒的研究进展 | 第11-39页 |
| 1 病毒分类 | 第11-12页 |
| 2 理化特性 | 第12-13页 |
| 3 分子生物学特性 | 第13-16页 |
| 4 流行病学 | 第16-18页 |
| 5 致病机制 | 第18-20页 |
| 6 临床症状及病理变化 | 第20-21页 |
| 7 诊断 | 第21-23页 |
| 8 防控 | 第23-24页 |
| 9 心病毒反向遗传学研究进展 | 第24-28页 |
| 9.1 心病毒反向遗传学操作技术原理及影响因素 | 第24-25页 |
| 9.2 反向遗传学操作技术在心病毒研究中的应用 | 第25-28页 |
| 参考文献 | 第28-39页 |
| 下篇 研究内容 | 第39-77页 |
| 第二章 猪脑心肌炎病毒感染性克隆的构建及鉴定 | 第39-65页 |
| 1 材料 | 第40页 |
| 1.1 病毒与细胞 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.3 实验动物 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-52页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第40-41页 |
| 2.2 病毒总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.3 RT-PCR扩增目的基因片段 | 第42-44页 |
| 2.4 PCR产物回收与纯化 | 第44页 |
| 2.5 EMCV中间载体的构建 | 第44-46页 |
| 2.6 病毒全长cDNA克隆的构建 | 第46-47页 |
| 2.7 全长cDNA克隆的转染及病毒拯救 | 第47-48页 |
| 2.8 拯救病毒滴度测定 | 第48页 |
| 2.9 拯救病毒遗传标记的鉴定 | 第48页 |
| 2.10 间接免疫荧光试验 | 第48-49页 |
| 2.11 病毒生长曲线 | 第49页 |
| 2.12 病毒蚀斑试验 | 第49页 |
| 2.13 小鼠致病性试验 | 第49-52页 |
| 3 结果 | 第52-58页 |
| 3.1 EMCV基因组片段的扩增 | 第52-53页 |
| 3.2 全长cDNA质粒的构建 | 第53-54页 |
| 3.3 拯救病毒滴度测定 | 第54页 |
| 3.4 拯救病毒基因遗传标记的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.5 间接免疫荧光试验(IFA) | 第55页 |
| 3.6 病毒多步生长曲线 | 第55-56页 |
| 3.7 蚀斑试验 | 第56页 |
| 3.8 小鼠致病性试验 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 第三章 重组脑心肌炎病毒灭活疫苗小鼠免疫特性 | 第65-77页 |
| 1 材料 | 第66页 |
| 1.1 细胞、病毒、实验动物 | 第66页 |
| 1.2 主要试剂 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-69页 |
| 2.1 病毒增值 | 第66页 |
| 2.2 病毒滴度测定 | 第66页 |
| 2.3 病毒灭活条件 | 第66-67页 |
| 2.4 不同佐剂灭活疫苗的配制 | 第67页 |
| 2.5 小鼠免疫方案 | 第67-69页 |
| 2.6 数据统计分析 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-71页 |
| 3.1 病毒增值及滴度测定 | 第69页 |
| 3.2 疫苗物理性质 | 第69页 |
| 3.3 疫苗免疫效果 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 全文总结 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
