| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 上篇 文献综述 | 第13-29页 |
| 第一章 伪狂犬病病毒研究进展 | 第13-29页 |
| 1 病原学 | 第13-15页 |
| 1.1 病毒粒子结构 | 第13-14页 |
| 1.2 病毒基因组结构与蛋白 | 第14-15页 |
| 2 流行病学 | 第15页 |
| 3 致病机理 | 第15-16页 |
| 4 临床症状及病理变化 | 第16-17页 |
| 5 诊断方法 | 第17-18页 |
| 5.1 病毒的分离鉴定 | 第17页 |
| 5.2 电镜观察 | 第17-18页 |
| 5.3 血清中和实验(SN) | 第18页 |
| 5.4 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第18页 |
| 5.5 免疫荧光染色(IF) | 第18页 |
| 5.6 聚合酶链式反应(PCR) | 第18页 |
| 6 防控 | 第18-21页 |
| 6.1 PRV自然弱毒疫苗 | 第19页 |
| 6.2 灭活疫苗 | 第19页 |
| 6.3 PRV亚单位疫苗 | 第19-20页 |
| 6.4 DNA疫苗 | 第20页 |
| 6.5 基因缺失疫苗 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-29页 |
| 下篇 研究内容 | 第29-93页 |
| 第二章 江苏省猪伪狂犬病病毒强毒株分离与致病性研究 | 第29-47页 |
| 1 材料与方法 | 第30-37页 |
| 1.1 主要材料 | 第30页 |
| 1.2 病毒分离鉴定 | 第30-31页 |
| 1.3 病毒滴度测定 | 第31-32页 |
| 1.4 PRV gC、gD基因的PCR扩增、克隆与基因测序 | 第32-33页 |
| 1.5 基因遗传进化树分析 | 第33-34页 |
| 1.6 PRV gC、gD基因氨基酸序列比对分析 | 第34页 |
| 1.7 PRV不同毒株毒力比较 | 第34-36页 |
| 1.8 病理学观察 | 第36页 |
| 1.9 组织中PRV DNA载量的检测 | 第36-37页 |
| 2 结果 | 第37-42页 |
| 2.1 病毒分离与鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2 gC和gD基因序列分析 | 第38-39页 |
| 2.3 gC和gD氨基酸序列分析 | 第39-40页 |
| 2.4 猪人工感染试验结果 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 第三章 猪伪狂犬病病毒gB和gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | 第47-67页 |
| 1 材料与方法 | 第48-57页 |
| 1.1 材料 | 第48-49页 |
| 1.2 方法 | 第49-52页 |
| 1.3 小鼠免疫 | 第52页 |
| 1.4 间接ELISA筛选方法的建立 | 第52-53页 |
| 1.5 单克隆抗体的制备 | 第53-55页 |
| 1.6 单抗亚类鉴定 | 第55-56页 |
| 1.7 抗体分泌稳定性测定 | 第56页 |
| 1.8 单抗腹水制备 | 第56页 |
| 1.9 单抗特异性鉴定 | 第56-57页 |
| 2 结果 | 第57-62页 |
| 2.1 目的基因片段的扩增和重组质粒的构建 | 第57-58页 |
| 2.2 目的蛋白表达和纯化 | 第58-59页 |
| 2.3 免疫小鼠血清抗体效价的测定 | 第59页 |
| 2.4 阳性杂交瘤细胞株的建立 | 第59-60页 |
| 2.5 杂交瘤细胞株分泌McAbs的稳定性鉴定 | 第60页 |
| 2.6 单克隆抗体Ig亚型鉴定 | 第60页 |
| 2.7单抗Western-blot反应特性 | 第60-61页 |
| 2.8 间接免疫荧光试验 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 第四章 猪伪狂犬病病毒ZJ01超强毒株gB蛋白单克隆抗体的B细胞表位鉴定 | 第67-79页 |
| 1 材料与方法 | 第67-71页 |
| 1.1 材料 | 第67-68页 |
| 1.2 方法 | 第68-71页 |
| 2 结果 | 第71-74页 |
| 2.1 目的片段F1～F7的扩增 | 第71-72页 |
| 2.2 重组质粒pET-32a-F1～F7的构建与鉴定 | 第72页 |
| 2.3 重组蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第72-73页 |
| 2.4 Western blot鉴定gB蛋白B细胞表位 | 第73-74页 |
| 2.5 gB蛋白抗原表位的变异分析 | 第74页 |
| 3 讨论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 第五章 猪伪狂犬病毒gB阻断ELISA抗体检测方法的建立与应用 | 第79-93页 |
| 1 材料与方法 | 第79-83页 |
| 1.1 试剂、细胞及菌株 | 第79-80页 |
| 1.2 抗原蛋白的制备与纯化 | 第80页 |
| 1.3 单克隆抗体的纯化及辣根过氧化物酶(HRP)标记 | 第80页 |
| 1.4 阻断ELISA步骤 | 第80页 |
| 1.5 阻断ELISA最佳反应条件的选择 | 第80-82页 |
| 1.6 阻断ELISA临界值的确定 | 第82页 |
| 1.7 阻断ELISA的重复性试验 | 第82页 |
| 1.8 敏感性试验 | 第82页 |
| 1.9 特异性试验 | 第82页 |
| 1.10 交叉反应性试验 | 第82页 |
| 1.11 与商品试剂盒符合率 | 第82-83页 |
| 1.12 临床血清样品的检测 | 第83页 |
| 2 结果 | 第83-87页 |
| 2.1 单克隆抗体的纯化和HRP标记 | 第83页 |
| 2.2 阻断ELISA最佳反应条件的确定 | 第83-85页 |
| 2.3 阻断ELISA临界值的确定 | 第85页 |
| 2.4 阻断ELISA的重复性试验 | 第85-86页 |
| 2.5 敏感性试验 | 第86页 |
| 2.6 特异性试验 | 第86页 |
| 2.7 交叉反应性试验 | 第86页 |
| 2.8 符合率 | 第86-87页 |
| 2.9 临床血清样品的检测 | 第87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 全文总结 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
