| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 PEDV概述 | 第13-19页 |
| 1.1 PEDV的形态结构 | 第13页 |
| 1.2 PEDV基因组结构特点 | 第13-17页 |
| 1.2.1 复制酶多聚酶基因 | 第14-15页 |
| 1.2.2 结构基因 | 第15-16页 |
| 1.2.3 ORF3基因 | 第16-17页 |
| 1.3 PEDV病原学特性 | 第17页 |
| 1.4 PEDV致病机理 | 第17-18页 |
| 1.5 PEDV临床症状 | 第18页 |
| 1.6 PEDV病理变化 | 第18页 |
| 1.7 PEDV流行情况 | 第18-19页 |
| 2 PEDV诊断方法研究进展 | 第19-24页 |
| 2.1 病原学检测 | 第19页 |
| 2.1.1 分离鉴定 | 第19页 |
| 2.2 免疫学方法 | 第19-21页 |
| 2.2.1 免疫电镜法 | 第19-20页 |
| 2.2.2 免疫荧光法 | 第20页 |
| 2.2.3 血清中和试验 | 第20页 |
| 2.2.4 酶联免疫吸附试验 | 第20-21页 |
| 2.2.5 免疫胶体金技术 | 第21页 |
| 2.3 分子生物学技术 | 第21-24页 |
| 2.3.1 核酸探针杂交技术 | 第21页 |
| 2.3.2 RT-PCR法 | 第21-22页 |
| 2.3.3 逆转录-环介导等温核酸扩增技术 | 第22页 |
| 2.3.4 原位PCR法 | 第22页 |
| 2.3.5 巢式PCR | 第22-23页 |
| 2.3.6 限制性片段长度多态性分析 | 第23页 |
| 2.3.7 实时荧光定量RT-PCR | 第23-24页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二部分 研究内容 | 第25-61页 |
| 第一章 PEDV ORF3基因的变异分析 | 第25-40页 |
| 1 材料 | 第25页 |
| 1.1 菌株、质粒 | 第25页 |
| 1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 1.3 主要仪器 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-30页 |
| 2.1 引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2 PEDV ORF3基因的克隆 | 第26-30页 |
| 2.2.1 PEDV RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.2 PEDV PCR | 第26-27页 |
| 2.2.3 PEDV ORF3基因的克隆 | 第27-30页 |
| 2.2.4 PEDV ORF3基因遗传进化分析 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-38页 |
| 3.1 RT-PCR鉴定结果 | 第30-31页 |
| 3.2 PEDV ORF3基因序列分析 | 第31-34页 |
| 3.3 PEDV ORF3基因遗传进化树构建 | 第34-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 4.1 关于PEDV的流行情况 | 第38页 |
| 4.2 PEDV ORF3基因的变异分析 | 第38-39页 |
| 5 小结 | 第39-40页 |
| 第二章 Eva Green荧光定量RT-PCR检测PEDV方法的建立 | 第40-61页 |
| 1 材料 | 第40页 |
| 1.1 菌株、质粒 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-44页 |
| 2.1 引物设计 | 第40-41页 |
| 2.2 Eva Green荧光定量检测PEDV方法的建立 | 第41-44页 |
| 2.2.1 PEDV ORF3基因的标准质粒制备 | 第41-42页 |
| 2.2.2 EG-qRT-PCR反应条件的优化 | 第42页 |
| 2.2.3 EG-qRT-PCR标准曲线和熔解曲线的建立 | 第42页 |
| 2.2.4 EG-qRT-PCR特异性试验 | 第42页 |
| 2.2.5 EG-qRT-PCR重复性试验 | 第42页 |
| 2.2.6 EG-qRT-PCR灵敏度试验 | 第42-43页 |
| 2.2.7 EG-qRT-PCR的临床应用 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-57页 |
| 3.1 PEDV ORF3基因标准质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.2 EG-qRT-PCR退火温度及引物浓度优化结果 | 第45-46页 |
| 3.3 EG-qRT-PCR标准曲线和熔解曲线的制作 | 第46-48页 |
| 3.4 EG-qRT-PCR特异性试验结果 | 第48-49页 |
| 3.5 EG-qRT-PCR重复性实验结果 | 第49-51页 |
| 3.6 EG-qRT-PCR敏感性试验结果 | 第51-52页 |
| 3.7 EG-qRT-PCR临床病料检测结果 | 第52-54页 |
| 3.8 PEDV商品疫苗病毒含量的检测 | 第54页 |
| 3.9 PEDV不同组织病毒含量检测 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 5 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第77页 |
