| 致谢 | 第1-5页 |
| 目录 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| ·概述 | 第13页 |
| ·纤维素酶 | 第13-18页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第14页 |
| ·纤维素酶协同作用机制 | 第14-16页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第16-17页 |
| ·里氏木霉纤维素酶 | 第17-18页 |
| ·纤维二糖酶 | 第18-23页 |
| ·黑曲霉纤维二糖酶 | 第18-20页 |
| ·黑曲霉纤维二糖酶的性质 | 第18-19页 |
| ·黑曲霉纤维二糖酶的作用底物 | 第19页 |
| ·纤维二糖酶的作用机制 | 第19页 |
| ·纤维二糖酶活性中心结构 | 第19-20页 |
| ·纤维二糖酶的抑制和激活 | 第20页 |
| ·纤维二糖酶的应用 | 第20-23页 |
| ·在食品领域中的的应用 | 第20-22页 |
| ·在医药领域中的应用 | 第22-23页 |
| ·纤维二糖酶的其他应用 | 第23页 |
| ·纤维二糖酶在酵母系统中的异源表达 | 第23-30页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第24-25页 |
| ·纤维素酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第25-26页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第26-30页 |
| ·影响毕赤酵母表达的因素 | 第27-30页 |
| ·纤维素酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第30页 |
| ·本课题思路 | 第30-33页 |
| 第二章 黑曲霉纤维二糖酶基因在工业酿酒酵母中的表达 | 第33-55页 |
| 引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第33-34页 |
| ·试剂 | 第34-35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-45页 |
| ·PCR反应 | 第35-36页 |
| ·酶切与连接 | 第36-38页 |
| ·T质粒载体连接 | 第38页 |
| ·质粒载体的构建 | 第38-41页 |
| ·质粒的线性化 | 第41页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第41-42页 |
| ·酿酒酵母电转化 | 第42-43页 |
| ·遗传酶素抗性的验证 | 第43页 |
| ·酵母发酵产酒精策略 | 第43页 |
| ·发酵液成分测定 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE | 第43-44页 |
| ·蛋白浓缩 | 第44-45页 |
| ·纤维二糖酶(CB)活力的测定 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-53页 |
| ·PYXK212的构建 | 第45-46页 |
| ·PYXK212T的构建 | 第46-47页 |
| ·PYXK212T-αbgl的构建 | 第47-48页 |
| ·PYXK212TI-αbgl的构建 | 第48-49页 |
| ·酿酒酵母电转化及转化子筛选 | 第49-50页 |
| ·酿酒酵母转化子的PCR验证 | 第50页 |
| ·转化子酒精发酵实验 | 第50-51页 |
| ·SDS-PAGE验证及酶活分析 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-55页 |
| 第三章 黑曲霉纤维二糖酶基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达 | 第55-69页 |
| 引言 | 第55页 |
| ·材料与方法 | 第55-62页 |
| ·菌株与质粒 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55-56页 |
| ·培养基 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-62页 |
| ·PCR反应 | 第57页 |
| ·酶切与连接 | 第57-58页 |
| ·T质粒载体连接 | 第58页 |
| ·质粒的线性化 | 第58页 |
| ·质粒载体的构建 | 第58-59页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第59-60页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第60页 |
| ·毕赤酵母高拷贝转化子的筛选 | 第60页 |
| ·毕赤酵母基因组的提取 | 第60-61页 |
| ·毕赤酵母转化子的验证 | 第61页 |
| ·外源蛋白表达策略 | 第61页 |
| ·SDS-PAGE | 第61页 |
| ·纤维二糖酶(CB)活力的测定 | 第61-62页 |
| ·重组酶最适温度和最适pH的测定 | 第62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-68页 |
| ·pPIC9K-bgl的构建 | 第62-63页 |
| ·毕赤酵母的转化及重组子的筛选 | 第63-64页 |
| ·高拷贝转化子NPP1的PCR验证 | 第64-65页 |
| ·NPP1表达黑曲霉bgl基因的验证及SDS-PAGE | 第65页 |
| ·NPP1产酶时间进程 | 第65-67页 |
| ·重组酶最适温度和最适pH | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 第四章 重组毕赤酵母发酵产纤维二糖酶的研究 | 第69-81页 |
| ·材料与方法 | 第69-71页 |
| ·菌种 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69-70页 |
| ·培养基 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-71页 |
| ·两步法发酵产酶实验 | 第70页 |
| ·一步法发酵产酶实验 | 第70-71页 |
| ·菌落计数 | 第71页 |
| ·纤维二糖酶(CB)活力的测定 | 第71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-80页 |
| ·两步法发酵条件优化 | 第71-75页 |
| ·诱导前菌体浓度的影响 | 第71-72页 |
| ·甲醇浓度的影响 | 第72-73页 |
| ·pH的影响 | 第73-74页 |
| ·两步发酵法时间进程 | 第74-75页 |
| ·一步发酵法条件优化 | 第75-80页 |
| ·葡萄糖浓度对产酶的影响 | 第75-76页 |
| ·玉米浆粉对产酶的影响 | 第76-77页 |
| ·pH的影响 | 第77-78页 |
| ·甲醇浓度的影响 | 第78页 |
| ·混合补料 | 第78-79页 |
| ·重组酵母发酵产酶进程 | 第79-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 第五章 纤维二糖酶在纤维素水解中的协同作用研究 | 第81-91页 |
| 引言 | 第81页 |
| ·材料与方法 | 第81-86页 |
| ·纤维原料 | 第81页 |
| ·试剂 | 第81-82页 |
| ·酶制剂 | 第82-83页 |
| ·实验方法 | 第83-86页 |
| ·酸处理 | 第83页 |
| ·纤维物料成分测定 | 第83-84页 |
| ·酶活力测定 | 第84-85页 |
| ·还原糖含量的测定 | 第85页 |
| ·批次酶解 | 第85-86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-90页 |
| ·稀酸预处理前后玉米芯成分分析 | 第86页 |
| ·CB协同纤维素酶水解纤维素效果比较 | 第86-87页 |
| ·批式酶解工艺参数的优化 | 第87-89页 |
| ·酶系组成的影响 | 第87-88页 |
| ·非离子型表面活性剂对酶解的影响 | 第88页 |
| ·微量元素对酶解的影响 | 第88-89页 |
| ·纤维素酶协同水解玉米芯残渣的时间进程 | 第89-90页 |
| 结论 | 第90-91页 |
| 第六章 结论与建议 | 第91-95页 |
| ·结论 | 第91-92页 |
| ·展望 | 第92-95页 |
| 参考文献 | 第95-107页 |
| 附录 | 第107页 |
