| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-12页 |
| 第一部分 文献综述及研究的目的与意义 | 第12-26页 |
| 一 文献综述 | 第12-25页 |
| 1 细小病毒概述 | 第12页 |
| 2 猪细小病毒概述 | 第12-18页 |
| ·猪细小病毒的病原学 | 第12-14页 |
| ·猪细小病毒的分子生物学特性 | 第14-16页 |
| ·猪细小病毒的基因组结构 | 第14-15页 |
| ·猪细小病毒的DNA复制 | 第15页 |
| ·猪细小病毒编码的蛋白及功能 | 第15-16页 |
| ·猪细小病毒的致病机制 | 第16页 |
| ·猪细小病毒的流行病学 | 第16-17页 |
| ·猪细小病毒的防制 | 第17-18页 |
| 3 MicroRNAs的概述 | 第18-23页 |
| ·MicroRNAs的发现 | 第18页 |
| ·MicroRNAs的合成 | 第18-19页 |
| ·MicroRNAs的作用机制 | 第19-20页 |
| ·MicroRNAs的研究方法 | 第20-21页 |
| ·microRNAs基因预测和靶基因预测 | 第21页 |
| ·MicroRNAs与免疫 | 第21-23页 |
| 4 microRNAs在宿主-病毒中的作用 | 第23-25页 |
| 二 研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二部分 试验部分 | 第26-54页 |
| 第一章 PK-15细胞microRNAs数据库的建立及与PPV有关的microRNAs的分析 | 第26-40页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| ·细胞及毒株 | 第26页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂的配置 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-31页 |
| ·PK-15细胞的传代培养 | 第27页 |
| ·TCID_(50)的测定 | 第27页 |
| ·PPV感染 | 第27页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·PK-15细胞microRNAs数据库的建立 | 第28-29页 |
| ·细胞样品RNA的提取及鉴定 | 第28页 |
| ·数据库的建立及高通量测序 | 第28页 |
| ·miRNAs的筛选 | 第28-29页 |
| ·miRNAs荧光定量的验证 | 第29-31页 |
| 3 结果 | 第31-37页 |
| ·TCID_(50)检测结果 | 第31-32页 |
| ·PPV感染PK-15细胞 | 第32页 |
| ·RNA样品的检测 | 第32-33页 |
| ·高通量测序结果统计 | 第33-35页 |
| ·差异表达的miRNAs及其靶基因的预测 | 第35-36页 |
| ·荧光定量验证结果 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 5 小结 | 第39-40页 |
| 第二章 PPV荧光定量方法的建立及部分miRNAs功能验证 | 第40-54页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| ·细胞、菌株及毒株 | 第40页 |
| ·生物试剂及器材 | 第40页 |
| ·主要试剂的配制 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-45页 |
| ·PPV引物合成 | 第41页 |
| ·PPV DNA抽提 | 第41-42页 |
| ·标准质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·荧光定量PCR扩增与产物的回收 | 第42页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·连接与转化 | 第43页 |
| ·质粒的抽提与鉴定 | 第43页 |
| ·荧光定量PCR | 第43-44页 |
| ·PPV荧光定量标准曲线的绘制 | 第43-44页 |
| ·重复性和特异性 | 第44页 |
| ·miRNAs靶标的预测与功能的验证 | 第44-45页 |
| ·靶标的预测及miRNAs筛选 | 第44页 |
| ·转染 | 第44-45页 |
| ·荧光定量检测 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-51页 |
| ·PPV荧光定量引物检测 | 第45-46页 |
| ·重组质粒构建及测序 | 第46-47页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线绘制 | 第47页 |
| ·荧光定量PCR重复性和特异性 | 第47-48页 |
| ·靶标预测与功能验证 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附表 | 第67-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第80页 |