| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分：实验部分 | 第12-58页 |
| 第一章：载体的构建 | 第12-30页 |
| 1 材料 | 第13-14页 |
| ·主要仪器设备 | 第13页 |
| ·实验材料和试剂 | 第13-14页 |
| 2 方法 | 第14-21页 |
| ·CRISPR/Cas9表达载体的构建和效率检测 | 第14-18页 |
| ·敲入载体fat-1(5’h-pCAGDNA3-fat-1-3’h)的构建 | 第18-21页 |
| 3 结果 | 第21-26页 |
| ·CRISPR/Cas9系统的优化和sgRNA表达载体的构建 | 第21-22页 |
| ·Surveyor突变检测结果 | 第22-23页 |
| ·敲入载体fat-1(5’h-pCAGDNA3-fat-1-3’h)的构建 | 第23-26页 |
| 4. 讨论 | 第26-27页 |
| ·CRISPR/Cas9介导的基因编辑 | 第26页 |
| ·敲入载体5’h-pCAGDNA3-fat-1-3’h载体的构建 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-30页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9介导的MSTN基因敲除同时定点整合外源基因fat-1单克隆细胞的筛选 | 第30-47页 |
| 1. 材料 | 第30-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·化学试剂与耗材 | 第31页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-35页 |
| ·电穿孔法转染GEFs | 第32页 |
| ·单克隆细胞系的挑选 | 第32-33页 |
| ·基因修饰细胞系的鉴定 | 第33-35页 |
| 3 结果 | 第35-43页 |
| ·转基因单克隆细胞系的筛选 | 第35-36页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第36-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 第三章 核移植技术制备转基因阿尔巴斯绒山羊 | 第47-57页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| ·化学试剂与实验材料 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-50页 |
| ·供体细胞的制备 | 第48页 |
| ·受体卵母细胞的收集和体外成熟培养 | 第48页 |
| ·卵子去核和体细胞核移植 | 第48-49页 |
| ·体细胞和去核卵母细胞的融合 | 第49页 |
| ·重构胚的激活 | 第49页 |
| ·重构胚胎的体外培养 | 第49页 |
| ·克隆胚胎移植 | 第49页 |
| ·妊娠检查 | 第49-50页 |
| ·转基因羊的接产 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-54页 |
| ·供体细胞的制备 | 第50-51页 |
| ·卵母细胞的采集与成熟培养 | 第51页 |
| ·重构胚的构建及融合 | 第51-52页 |
| ·重构胚的体外培养及移植 | 第52-53页 |
| ·克隆胚胎移植及妊娠检查 | 第53页 |
| ·转基因羊的接产及鉴定 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 第二部分 综述部分 | 第58-70页 |
| 1 CRISPR/Cas技术概述 | 第58-61页 |
| ·CRISPR/Cas的研究历史 | 第58-59页 |
| ·CRISPR/Cas的结构 | 第59页 |
| ·CRISPR/Cas9技术介导基因组靶向修饰的作用机理 | 第59-61页 |
| 2 CRISPR/Cas9技术在哺乳动物转基因中的应用 | 第61-64页 |
| ·CRISPR/Cas9技术在制备转基因敲除动物中的应用 | 第61-62页 |
| ·CRISPR/Cas9技术在制备转基因敲入动物中的应用 | 第62-63页 |
| ·CRISPR/Cas9技术在制备转基因动物时的优、缺点 | 第63-64页 |
| 3 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录 | 第70-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
